Fei'mente: Methoden z. (jiialit. u. (Hiantit. Verfolgung d. Fermentwirkung. 9') 



Moni^o (lestilliertom Wasser eiiiii^e Stniulcn im Schüttelappai'at /u schütteln, 

 fhcr die Iieaktion des iMediuiiis läßt sieh alliiemeiiics nicht ansehen: es 

 t^ibt Lii)asen (pflaii/liche), \v('lclu' nur bei sehr deutlich saurer Iieaktion 

 (27o Kssiiisäure) wirken, und andere, die neutrale oder alkalische Iieak- 

 tion erfordern. Im /weit'elfalle setze man daher das I\eaktionst>emisch in 

 :» verschiedenen Proben, sauer, neutral und alkalisch, au. 



Der Säuretiter einer jeden Mischunii' wird dann zunächst festirestellt, 

 indem eine abgemessene Probe mit glfh'hem X'olumcn absolutem Alkohol 

 versetzt wird, um die in Wasser unlöslichen Fettsäui-cn in Lösung zu 

 bringen, und mit Phenolphtalein gegen Vio n XaOll titriert wird. Nach 

 Ablauf von Stunden oder Tagen wird an einer zweiten Vvolw. diese Titra- 

 tion nach Alkoholzusatz wiederholt und so die Entstellung freier Fettsäuren 

 nachgewiesen. Man beachte, daü eine ausbleibende Feruu'ntv/irkung unter 

 Umständen durch Zusatz von Mangansulfat in (Jang gesetzt werden kann, 

 welches nach Connstein und Hoyer^) bei pflanzlichen Lipasen. als Akti- 

 vator wirkt. Man nehme auf etwa lOcm^ Ölemulsion 5 cm^ einer Lösung 

 von MnS(J4 (4:1000). Als Desinfiziens verwenden Connstein und Hoyer 

 Chloralhydrat. 



Ein Beispiel über die Mengenverhältnisse eines Lipascnachweises (nach 

 Paul Mayer): Je ^) on^ einer ■2<'/oigen wässerigen Emulsion von Lezithin 

 ..Agfa" werden mit 1 cm^ „Steapsin" (Grübler) im Reagensglas versetzt, 

 und je eine solche Probe ö, 20 und 40 Stunden im Brutschrank bei BT^* 

 belassen, sowie eine Kontrolle ohne Steapsin. 



Danach werden die Proben unter Zusatz von reichlich HD-e^/nigem 

 Alkohol quantitativ in ein Becherglas übergeführt und mit \/]i, Xormal- 

 natronlauge titriert, unter Anwendung einer methylalkoholischen Lösung 

 von Phenolphtalein als Indikator. Es wird zunächst der Säuretiter der 

 Lösung ohne Ferment bestimmt, welcher übrigens im frischen Zustand 

 und nach dem Aufenthalt im Brutschrank der gleiche ist und auf dem 

 Fettsäuregehalt des Lezithins und des Ferments beruht. Er beträgt für 

 f) o>r' der Lezithinaufschwemmung z.B. 0"H cw-' 7io n-Xa()II, für \ mi^ 

 Steapsin 0'4(';y^^ ^ jo n-XaOH, zusammen also 0"7 c//^'' Vio ii-^^^^^H- Dieser 

 Wert wird bei den übrigen Proben abgezogen. So fand sich z. P>. : 



Nach T) Stunden : VO cin'^ i/,„ n-NaOH 

 nach 20 Stunden: Vb cm'^ \/,n n-Na()H 



Titer nach Abzug der ursprünghchen Azidität. 



Ein anderes Beispiel nach Connstein und Hoi/cr mit Verwendung 

 von Ilicinuslipase : ng Lipase (Piicinussamen) werden mit 10// Wasser, 

 worin {)-2 ry Essigsäure und 0"1 r/ C'hloralhvdrat gelöst sind, verrieben. Nach 

 24 Stunden ist zirka S0% der theoretisch möglichen Fettsäure in freier 

 Form vorhanden und durch Titration nachweisbar. 



') CoiiHstcin, Jloi/cr iiiiil Waftoihi tu/ , l'ber fernientative Fettspaltiing. Ber. cl. 

 Deutsch, ehem. Ges. Jg. 35. S. 3988 (1902). 



