^\9 L. Michaelis. 



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nehmen und diese analysieren. ( )der man stellt eine ^anze Reihe «ileich- 

 artiiier Gemische von Ferment und Substrat her. unterbricht die Ferment- 

 wirkung- der einzelnen Versuche zu verschiedenen Zeiten und analysiert 

 die einzelnen Versuche. Als Beispiel für eine solche Methode sei die Vol- 

 hardsche Methode ^ ) zum ^'erfolg•en der Pepsinwirkung angeführt. 

 Die Volharchche Methode gestaltet sich folgendermaßen : 



1. Herstellung der Kaseinlösung. 100^ Kasein werden in 1 MVasser 

 unter Schütteln eingeweicht, dann gibt man 80 cm^ n-Na OH zu imd füllt 

 auf 2 1 auf. ^lan erwärmt bis etwa 90", um das Kasein in Lösung zu 

 bringen, nach dem Al)kühlen versetzt man mit etwas Toluol. Die Lösung 

 ist gut haltbar. 



2. Vorbereitung zum A'ersuch. In einer langhalsigen Flasche, die mit 

 2 ^larken bei HOO und 400 cni^ versehen ist, läßt man zuerst zur Ansäuerung 

 genau \l cm'^ n-HCl-Lösung einfUeßen , füllt auf IbO cm^ auf und gibt 

 100 cm^ der Kaseinlösung zu. Dann wird auf 40" erwärmt, eine gemessene 

 Menge der Pepsinlösung zugelassen und auf ;>00 cm^ aufgefüllt. Derartiger 

 Kolben stellt man eine ganze Pieihe auf und unterl)richt die Aerdauung 

 zu verschiedenen Zeitpunkten. 



.'). Durchführung der Analyse. Die ^'erdaullng wird unterbrochen, 

 indem 100 cm'^ 20"/,)iger Natriumsulfatlösung zugesetzt werden. Das un- 

 verdaute Kasein fällt dabei aus. Es wird abfiltriert und je 100 oder 200 em^ 

 des Filtrats mit yL n_>,fa OH gegen Phenolphtalein titriert. Von der Azidität 

 ist die vorher bestimmte Azidität der Kaseinlösung abzuziehen , sowie die 

 Azidität der Pepsinlösung. So erhält man den Zuwachs [des Säuretiters, 

 der auf der IMldung der salzsauren Peptone beruht. Das ausfallende Kasein 

 hat nämlich die Eigenschaft, HCl zu binden; finden sich aber Peptone in der 

 Lösung, so tritt eine Konkurrenz zwischen dem Kasein und den Peptonen 

 um die Salzsäure ein, und es findet sich um so mehr HCl (als Pepton- 

 hydrochlorid ) in Lösung, je mehr Pepton im A'ergleich zum Kasein vor- 

 handen ist. Man kann so die Aziditätszunahmen als Maßstab für den Kasein- 

 abbau betrachten. 



Bei manchen physikalischen Methoden kann man jedoch den Fort- 

 gang der Pieaktion an einer einzigen Probe verfolgen. Von den letzteren 

 seien einige erläuternde Beispiele genannt. 



1. Optische Methoden. Besteht die ^Virkung des Ferments in einer 

 Änderung der Drehung der Ebene des polarisierten Lichtes , so läßt sich 

 der ^'erlauf im Polarisationsapparat selbst verfolgen. So ist, es bei der 

 Spaltung der Saccharose durch Invertase, bei der Spaltung der optisch 

 aktiven und der razemischen, asymmetrisch spaltbaren Polypeptide durch 

 Fermente. Die Beschreibung der dazu notwendigen Methoden der Polari- 

 sation vgl. Bd. I 



*) Volhard, Über eine ueue Methode der quantitativen Pepsinbestimmuug etc. 

 Miiucheiiermed. AYochenschr. 1903. S. 2129. 1907. Heft 9. — ^-LöAZem, Über die Volhardsche 

 Methode etc. Hofmeisters Beitr. Bd. 7. S. 120 (1905). 



