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die klare Flüssigkeit mit starkem Alkohol versetzt. Der Niederschlag setzt 

 sich leicht ab; durch Dekantieren läßt er sich von der darüber stehenden 

 Flüssigkeit leicht trennen. 



Der Rückstand wird mm auf ein kleines Faltenfilter gebracht, mit 

 Alkohol gewaschen und noch feucht auf porösen Porzellanschalen über 

 Schwefelsäure im Vakuum l^ei niederer Temperatur (nicht über 25°j rasch 

 getrocknet. 



Dieser trockene Rückstand löst sich vollkommen in Wasser, oxydiert 

 sich nicht an der Luft, enthält somit keinen oxydablen Körper ( Tyrosin etc.). 

 Die Lösung enthält keine Lakkase, bläut also frische Guajakemiüsion nicht, 

 wohl aber ist darin Peroxydase vorhanden, was durch Zusatz von Hydro- 

 peroxyd zur Guajakemulsion sich gleich zeigt. 



Lösungen von Tyrosinase in Wasser halten sich bei Zusatz von To- 

 luol ziemhch lang (mehrere Tage), aber die Wirkung nimmt langsam ab. 

 Es ist jedenfalls besser, die Lösung immer frisch zu bereiten. 



B. Pilztyrosinase. Bekanntbch enthalten viele Pilze Lakkase und 

 Tyrosinase. Am bequemsten ist, Lactarius vellereus in Laubwäldern zu 

 sammeln; dieser Pilz, der sehr leicht zu erkennen und in Mitteleuropa der 

 grollte und zugleich einer der verbreitetsten ist. ist kreideweiß, ziemhch zer- 

 brechlich, mit dicken Lamellen an der L'nterseite des trichterförmigen Hutes 

 und gibt beim Anschneiden einen reichlichen weißen oder schwach gelblichen 

 Milchsaft, welcher scharf schmeckt. Von diesem Pilz können leicht 50 kf/ in 

 einem Nachmittag gesammelt werden. Die Pilze werden so rasch wie möglich 

 zerstückelt, am besten mittelst einer Hackmaschine, wie sie gewöhnlich in 

 Küchen gebraucht wird. Die schleimige Masse wird stark gepreßt, der dunkle 

 Saft mit starkem Alkohol versetzt. Der reichUche Niederschlag wird auf einem 

 Tuch gesammelt und die Lösung abfiltriert. Der noch feuchte Niederschlag 

 Avird hierauf mit Wasser versetzt und zwei Tage unter Zusatz von Toluol 

 digeriert. Die filtrierte Flüssigkeit wird nun wieder durch Alkohol gefällt, 

 der Niederschlag gewonnen und eventuell noch einmal gereinigt. Die Lakkase 

 ist durch diese Behandlung viel mehr abgeschwächt als die Tyrosinase. 



Man kann auch die rohe Fermentmasse auf Tonplatten rasch trocknen 

 und zur späteren Extraktion der Tyrosinase verwenden. Mit der Zeit ver- 

 schwindet die Lakkase zum größten Teil und die Wasserextraktion der 

 rohen Uxydase liefert durch Zusatz von Alkohol ein sowohl von Lakkase 

 Avie von Peroxydase freies Ferment, das die Reaktionen einer gereinigten 

 Tyrosinase hefert (siehe unten). 



Es werden von der Rohtyrosinase 50^ fein zerrieben und mit 500 f/ 

 Wasser 48 Stunden mazerieren gelassen, hierauf filtriert. Das Filtrat wird 

 mit 2 l 90Voig'em Alkohol versetzt, sehr kurze Zeit stehen gelassen, abdekan- 

 tiert und der Niederschlag in wenig Wasser gelöst und mit dem dreifachen 

 ^'olumen starken Alkohols versetzt. Der Niederschlag wird, wie oben, behandelt 

 und getrocknet. Er ist frei sowohl von Peroxydase wie von Lakkase (A). 



^) Cotte, Presence de la tyrosinase chez le „Suberites Domuncula" in Comptes 

 rendus Soc. Biolog. T. 55, p. 137 (1903). 



