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kaleszenzgrad und läßt dadurch den Zusatz zu großer Flüssigkeitsmengen 

 vermeiden. Man fügt solange Uranylacetat hinzu, bis sich grobe Flocken 

 bilden welche in kürzester Zeit sich abzusetzen beginnen, dekantiert und 

 filtriert. Der Rückstand bleibt, nachdem er mit 0-'2^/o\geY Sodalösung fein 

 verrieben ist, mindestens 12 Stunden stehen, worauf er filtriert wird. So 

 gewinnt man eine klare, eiweißarme Jlüssigkeit, in welcher die Fermente 

 in wirksamer Form enthalten sind. Wünscht man reinere Präparate, so 

 kann man Fällen und Ausziehen wiederholen. Zweckraäßigerweise setzt man 

 behufs Konservierung erst jetzt Toluol hinzu, da dessen Anwesenheit sonst 

 den Verlauf der einzelnen Operationen zu sehr verlangsamt. Schnelligkeit 

 des Arbeitens ist nämlich wegen der auch bei Zusatz antiseptischer Mittel 

 drohenden Fäulnis zu empfehlen. Ferner wird die Fermentausbeute desto 

 geringer, je später die Enzyme aus dem Uranylacetatniederschlag ausge- 

 zogen werden. 



Neuerdings hat in meinem Laboratorium Hafa ^ ) eine Methode der 

 Isolierung eines proteolytischen Leberfermentes ausgearbeitet, die zunächst 

 nach folgenden Angaben ausgeführt wurde: 



MögUchst fein zerhackte Leber wird mit physiologischer Kochsalz- 

 lösung (1 cm^ pro 1 fj) versetzt, gut geschüttelt uud bleibt eine Nacht auf 

 Eis. Dann wird kohert und der Saft abgepreßt und nochmals filtriert. Das 

 Filtrat wird mit Chloroform im Eisschrank aufbewahrt. Die ganze Dar- 

 stellung bis zu diesem Punkt muß bei möglichst niedriger Temperatur er- 

 folgen. Geht man so vor, so erhält man bessere Ausbeuten und ebenso 

 wirksamen Saft, wie wenn man die Leber mit Quarzsand und Kieselgur 

 verarbeitet. Dieses erste Extrakt ist trüb und sehr eiweißreich. 



Eine weitere Peinigung läßt sich leicht folgendermaßen erreichen: Zu 

 einem Volumen des Extrakts fügt man '/lo Volumen Normalsalzsäure. Man 

 wartet, ohne den entstehenden Niederschlag abzufiltrieren, eine Stunde und 

 fügt nun Sodalösung soviel hinzu, daß die Säure fast vollkommen neutrah- 

 siert ist. Dann vdrd filtriert. Man erhält so eine klare und proteolytisch 

 gut wirksame Flüssigkeit. 



Dieses Verfahren habe ich hier geschildert, weil die Kenntnis dieses 

 Vorgehens das Verständnis eines noch vorteilhafteren Verfahrens erleich- 

 tert, das ebenfalls Hata in meinem Laboratorium ausgearbeitet hat. 



100 fj Pferdeleber werden in einer Reibschale tüchtig zerrieben und 

 dann mit 100 cm^ n/20-Salzsäure versetzt, die zugleich O'Söo/o Kochsalz 

 enthält. Man fügt 10 cmß Chloroform dem Gemisch zu. Nun überläßt man 

 das Gemisch sich selbst, schüttelt nur von Zeit zu Zeit durch. Braucht man 

 die Fermentlösung bald , so führt man den Versuch 24 Stunden bei oT" 

 durch. Ln anderen Falle beläßt man das Gemisch 7 Tage bei Zimmer- 

 temperatur. Nach Beendigung der Digestion wird durch Gaze isoliert, mit 

 Normal-Sodalösung neutralisiert und filtriert. Man erhält dann ca. 120 rw» 



^) -S'. Hata, Zur Isolierung der Leberfermente, insbesontlere des gelatinnlytischen 

 Leberfermeutes. Biochem. Zeitschr. Bd. 16. S. 383—390 (11)09). 



