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nicht unter den Verdauungsfermenten, sondern nur intrazellulär; sie wird 

 nicht nach außen sezerniert, sondern kann nur nachgewiesen werden, in- 

 dem man die Zellen selbst resp. ihre künsthchen Extrakte zum Versuche 

 verwendet. 



Spezieller Nachweis der aufspaltenden Xuklease und Isolierung 



der Abbauprodukte. 



Zahh'eich sind die Versuche, durch Autolyse der Hefe und tierischer 

 Organe und durch Aufsuchen freier Phosphorsäure und freier Purinbasen 

 unter den Autolyseprodukten eine durch Fermente bewirkte Nukleinspal- 

 tung zu beweisen. Es bedarf besonderer Erwähnung, daß bei Digestion des 

 Buchnerschen Hefepreßsaftes Purinbasen und Phosphorsäure als Abbau- 

 produkte nachgewiesen werden konnten, i) Der exakte Nachweis der Nu- 

 klease ist jedoch erst nach Verwendung von Nukleinsäure erfolgt. 



Nukleasen achweis in Organextrakten 2): Eine 4°/oige Lösung 

 von a-thymonukleinsaurem Natrium (50 — 100 cm^) wird einige Tage der 

 Wirkung des zu untersuchenden Extraktes ausgesetzt; dann wird das Ge- 

 misch filtriert und das Filtrat zur Beseitigung etwa noch vorhandener 

 Nukleinsäure mit Schwefelsäure versetzt. Der dabei etwa ausgefallene 

 Niederschlag wird abfiltriert ; aus dem Filtrat werden die Purinbasen mit 

 Quecksilbersulfatlösung ausgefällt. Der so erhaltene Niederschlag wird ab- 

 gesaugt, in Wasser aufgeschwemmt und unter Zusatz von etwas Salzsäure 

 mit Schwefelwasserstoff zerlegt. Dann wird wiederum filtriert und das 

 Filtrat durch Durchleiten von Luft vom Schwefelwasserstoff befreit. Nun 

 wird es mit ammoniakahscher Silberlösung gefällt, der entstandene Silber- 

 niederschlag abfiltriert, gut ausgewaschen, in AVasser aufgeschwemmt und 

 unter Zusatz von Salzsäure in der Wärme zerlegt. Vom Chlorsilber wird 

 abfiltriert, durch das Filtrat noch einige Blasen Schwefelwasserstoff geleitet 

 und dann wiederum filtriert. Das letzte Filtrat wird zwecks Abscheidung 

 von Kristallen (salzsauren Pminbasen) eingedampft. Die etwa ausgeschie- 

 denen Kristalle werden samt dem Rückstand in salzsäurehaltigem Wasser 

 gelöst, die Lösung filtriert und wiederum bis zum völligen Auskristallisieren 

 eingedampft. Die Kristalle werden mit Alkohol und Äther getrocknet und 

 gewogen. Will man den Beweis, daß man freie Purinbasen vor sich hat, 

 noch weiterführen, so prüft man die Kristalle mit Hilfe der von Burian ■') 



^) Hahn und Geret, Über das Hefe-Endotrvpsiu. Zeitschr. f. Biol. Bd. 11. S. 117 

 (1900). 



-) Fr. Sachs, Über die Nuklease. Zeitschr. f. physiol. Chemie. Bd. 46. S. 337 (1905). 



^} R. Burian, Diazoaminoverbindungen der Amidazole und der Puriusubstanzeu. 

 Chem. Berichte. Bd. 37. S. 696 (1904). — Derselbe, Zur Keuntnis der Bindung der 

 Purinbasen im Nukleinsäuremolckül. Chem. Berichte. Bd. 37. S. 708 (1901). — Dor- 

 selbe, Weitere Beiträge zur Kenntnis der Diazoaminoverbindungen der Purinbasen. 

 Zeitschr. f. physiol. Chemie. Bd. 51. S. 425 (1907). 



