696 40. Vorlesung. 



mann, H. Sachs u. a. über Benutzung der Komplementbindung für die 

 serologische Diagnostik mit Hilfe von Bakterienantigenen, Eiweiß- 

 körpern usw. aufgebaut, deren prinzipiell wichtige Ergebnisse bei der 

 Rotz-Komplementbindung verwertet sind. 



Der Komplementablenkungsversuch wird nacli den folgenden von Sehern 

 präzisierten Vorschriften ausgeführt: 



Als Antigen dient ein aus 48 Stunden bei ST'C auf 5proz. Glyzerinagar 

 gezüchteten Rotzbazillen-Kulturen hergestellter Extrakt. Die Kulturmasse wird mit 

 Phenolkochsalzlösung (25 com auf 1 Kultur) abgeschwemmt und die Suspension 3 Stun- 

 den bei 60" C im Wasserbade abgetötet, 24 Stunden im Schüttelapparat geschüttelt 

 und zentrifugiert. Die klare, über dem Bakteriensediment befindliche Flüssigkeit 

 stellt das Antigen dar, das in braunen Flaschen aufbewahrt wird. Zunächst wird die 

 Grenzdosis des Extraktes ermittelt, mit der eine bestimmte Menge Rotzserum kom- 

 plette Hemmung der Hämolyse gibt, während eine entsprechende Menge Normal- 

 serum komplette Lyse eintreten läßt. Die doppelte Menge dieser Dosis allein (ohne 

 jeglichen Serumzusatz) darf die Hämolyse nicht beeinträchtigen, wenn die ermittelte 

 einfache Extraktdosis im Komplementbindungsversuch verwendet werden soll. 



Die zu prüfenden Sera werden bei 56° C eine Stunde lang inaktiviert. Das 

 zu den Versuchen benötigte Meerschweinchenkomplement wird vor der Benutzung 

 auf Brauchbarkeit durch Titrieruug geprüft. Ist das Komplement eingestellt, so setzt 

 man unmittelbar vor der Anstellung eines Hauptversuches folgende Kontrollen an: 



1. Systemkontrolle = 2ccm physiol. Kochsalzlösung -f 1 ccm Komplement; 



2. Extraktkontrolle = 1 ccm physiol. Kochsalzlösung -j- 1 ccm Komplement + 1 ccm 

 Extrakt ; 



3. Rotzserumkontrolle mit Extrakt = 1 ccm physiol. Kochsalzlösung -{- 1 ccm Kom- 

 plement + 1 ccin Extrakt -f- 0"2 ccm Rotzserum ; 



4. Rotzserumkontrolle ohne Extrakt = 2 ccm physiol. Kochsalzlösung + 1 ccm Kom- 

 plement -f- 02 ccm Rotzserum ; 



5. Normalserumkontrolle = 1 ccm physiol. Kochsalzlösung -|- 1 ccm Komplement 

 -f 1 ccm Extrakt -|- 02 ccm Normalserum. 



Nachdem alle 5 Röhrchen in einem Wasserbade bei 38" C gehalten sind, wird 

 mit einer Pipette je Iccm Ambozeptor und Iccm 5proz. Hammelblutkörperchen- 

 aufschwemmung eingefüllt und gut durchgeschüttelt. Sodann werden die Röhrchen 

 nochmals für 20 Minuten in das Wasserbad von 38" C gestellt. 



Diese Kontrollen geben Aufschluß darüber, ob die für den Versuch verwen- 

 deten Materialien einwandfreie Resultate ergeben. Die Systemkontrolle zeigt an, ob 

 das hämolytische System gut funktioniert. Im Röhrchen 1, 2, 4 und 5 muß komplette 

 Hämolyse, in Röhrchen 3 dagegien komplette Hemmung der Lyse eingetreten sein. 



Haben die Kontrollen zu richtigem Resultat geführt, so wird zunächst, beson- 

 ders bei Massenuntersuchungen, die orientierende Komplementablenkung 

 ausgeführt. Für jedes zu untersuchende Serum wird nur 1 Röhrchen benötigt, In 

 dieses füllt man 0'2 ccm des Untersuchungsserums -f- Iccm ü'85proz. NaCl-Lösung. 

 Diese Mischung wird V2 Stunde zur Inaktivierung in ein Wasserbad von 58" C ge- 

 stellt. Dann wird 1 ccm Komplement -\- 1 ccm Extrakt aufgefüllt, der Inhalt des 

 Röhrchens durchgeschüttelt und 20 Minuten zur Bindung des Komplements an den 

 eventuell vorhandenen Rotzantikörper und das Rotzantigen in ein W^asserbad von 

 38" C gestellt. Nach Ablauf dieser Zeit füllt man in jedes der Röhrchen 2 ccm 

 sensibilisierter Blutkörperchen, schüttelt durch und übergibt die Röhrchen 

 für weitere 20 Minuten dem auf 38" C eingestellten Wasserbad. (Unter sensibilisierten 

 Blutkörperchen versteht man eine Flüssigkeit, die öproz. Blutkörperchenaufschwem- 

 mung und Ambozeptorverdünnung zu gleichen Teilen gemischt enthält und vor dem 

 Auffüllen in die Röhrchen 7* Stunde lang leicht angewärmt wird. Ambozeptor und 

 Blutkörperchen treten hierbei in Beziehung, die Blutkörperchen werden mit dem 

 hämolytischen Ambozeptor beladen bzw. sensibilisiert. Dadurch läuft die Hämolyse 

 später schneller ab.) 



Nach der Versuchszeit ist in dem Röhrchen entweder 1. komplette Lysis oder 

 2. komplette Hemmung der Lysis oder 3. eine unvollständige Lysis eingetreten bzw. 

 es besteht etwas Hemmung der Lysis. Im ersteren Falle gilt das Untersuchungsserum 

 als unverdächtig und wird nicht weiter untersucht. Ist durch die orientierende 

 Komplementablenkung aber Rotzverdacht begründet (Resultat 2 und 3), so wird die 

 Komplementablenkung mit verschieden abgestuften Serumdosen aus- 

 geführt. 



