Aliphatische Aminosäuren. 397 



Bestimmung: Zur quantitativen Bestimmung des GlykokoUs in den Eiweißspaltpro- 

 dukten hydrolysiert man 50 g Protein mit Salzsäure und neutralisiert mit Bleioxyd, entbleit 

 das Filtrat mit Schwefelwasserstoff, dampft auf 50 ccm ein, löst in 350 com lOproz. Natron- 

 lauge und schüttelt mit 25 ccm Benzoylchlorid. Nach Verschwinden des Geruches von Benzoyl- 

 ehlorid säuert man mit Salzsäure stark an und schüttelt mehrfach mit Essigester aus. Man 

 destiUiert das Lösungsmittel ab, versetzt im Kolben den Rückstand mit 100 ccm Chloroform, 

 wobei sich Hippursäure als feines, weißes Pulver abscheidet, während Benzoesäure und viel- 

 leicht entstandene Benzoyl Verbindungen anderer Aminosäuren i) in Lösung bleiben. Nach 

 24 Stunden wird abfiltriert tmd mit reinem Chloroform nachgewaschen und gewogen. Das 

 Resultat ist wegen der Lösüchkeit der Hippursäure in Chloroform zu kontroUieren. Durch 

 Anwesenheit von Leucin und Glutaminsäure wird die Bestimmung des Glykokolls nicht ge- 

 stört 2). Statt zur Trennung von Benzoesäure und Hippursäure Chloroform zu verwenden, 

 ist es zweckmäßiger, ein Gemisch von 100 ccm Chloroform und 5 ccm Benzol anzuwenden 3). 

 Man kann auch eine Stickstoffbestimmimg der noch nicht vöUig reinen Hippursäure aus- 

 führen und daraus das ursprüngüche GlykokoU berechnen*). — Um quantitativ neben Gly- 

 kokoll noch die anderen Monoaminosäuren der Eiweißhydrolyse ermitteln zu können, be- 

 stimmt man GlykokoU als Äthylesterhydrochlorid. Zu dem Zwecke werden 500 g Eiweiß 

 mit der Sfachen Menge rauchender Salzsäure (vom spez. Gew. 1,19) Übergossen, das GJemisch 

 auf dem Wasserbade unter fortwährendem Schütteln in Lösung gebracht imd diese nun- 

 mehr 6 Stunden am Rückflußkühler gekocht. Die dunkelbraun oder dunkelviolett gefärbte 

 Lösimg wird, faUs sich ungelöste Massen vorfinden, durch ein CoUrtuch abgenutscht und der 

 Rückstand mit Wasser ausgewaschen. Das Fütrat wird unter vermindertem Druck bei etwa 

 40° stark eingeengt. Ist viel Glutaminsäure zu erwarten, so bringt man diese zunächst als 

 salzsaures Salz zur Abscheidung (vgl. unter „Glutaminsäure"). Das Filtrat wird zum Sirup 

 eingedampft, mit 1500 ccm abs. Alkohol Übergossen und bis zur Sättigung gasförmige, trockne 

 Salzsäure eingeleitet. Es tritt hierbei Erwärmung auf. Sobald Salzsäuredämpfe aus der 

 Flüssigkeit entweichen, unterbricht man das Einleiten, läßt den gut verschlossenen Kolben 

 einige Zeit stehen und sättigt dann die abgekühlte Flüssigkeit nochmals mit gasförmiger 

 Salzsäure. Nach einigem Stehen wird die Flüssigkeit xmter vermindertem Druck auf etwa 

 2/3 des ursprüngUchen Volumens eingeengt; dann stellt man den Kolben in Eis und impft 

 mit einem Kryställchen von GlykokoUesterhydrochlorid und befördert die KrystaUisation 

 durch häufiges Rühren und Reiben. Ist reichlich GlykokoU vorhanden, so tritt bald Kry- 

 staUisation ein. Nach etwa 12 Stunden wird abgesaugt. Die KrystaUe werden mit kaltem 

 Alkohol gewaschen. Mutterlauge und Waschalkohol werden zusammen unter vermindertem 

 Druck auf die Hälfte abgedampft, nochmals mit Salzsäuregas gesättigt imd nach dem Impfen 

 xmd Aufbewahren in der Kälte eine zweite KrystaUisation des GlykokoUesterhydrochlorids 

 abfiltriert. SchUeßUch wird die Mutterlauge dieser KrystaUisation unter vermindertem Druck 

 bis zum zähen Sirup eingeengt und unter Anwendung der gleichen Menge abs. Alkohols die 

 Verestenmg wiederholt. Wieder wird unter vermindertem Druck auf etwa 1/3 Vol. eingeengt 

 imd nochmals versucht, GlykokoU als Esterhydrochlorid zu gewinnen. Es ist vorteUhaft, die 

 ganze Veresterung noch ein drittes Mal zu wiederholen. Ist nur wenig GlykokoU vorhanden, 

 so findet es sich neben Alanin, wenn man die bei der DestiUation der in Freiheit gesetzten 

 Ester erhaltene erste Fraktion verseift (vgl. bei „Alanin") 6). Das Verfahren Uefert um 

 so bessere Resultate, je größer die Menge des Glykokolls ist. Bei Anwesenheit von 20% Gly- 

 kokoU im Protein geUngt es, etwa ^/j desselben als Esterhydrochlorid aus dem Gemisch der 

 salzsauren Ester sofort abzuscheiden 6). Ein- bis zweimaliges UmkrystalUsieren des Salzes 

 aus heißem abs. Alkohol Uefert ein reines Präparat vom Schmelzp. 145° (korr.). Die mit 

 Alkohol und Äther ausgewaschenen KrystaUe werden bei 100 ° getrocknet und dann gewogen. 

 Das Esterhydrochlorid C4Hio02Na enthält 53,8% GlykokoU. — Die Trennung des GlykokoUs 

 vom Alanin gelingt durch Kombination des UmkrystalUsierens der freien Aminosäure aus 



1) Im Gegensatz zum GlykokoU entstehen bei der Kuppelung von Alanin, Asparaginsäure 

 und Glutaminsäure mit Benzoylchlorid in einer Lösung von Älkalihydroxyd nur geringe Mengen 

 der Benzoylkörper. E. Fischer, Berichte d. Deutsch, ehem. Gesellschaft S2, 2451 [1899]. 



2) Ch. S. Fisher, Zeitschr. f. physiol. Chemie 19, 164 [1894]. 



3) M. Gönner mann, Archiv f. d. ges. Phvsiol. 59, 42 [1895]. 

 *) Oeffcle, Pharmaz. Centralhalle 49, 203 [1908]. 



ö) E. Fischer, Zeitschr. f. physiol. Chemie 33, 151 [1901]. 

 «) E. Fischer, Zeitschr. f. physiol. Chemie 35, 229 [1902]. 



