432 Aminosäuren. 



mit warmem Petroläther aus, um die Benzoesäure zu entfernen. (Ausbeute fast quantitativ.) 

 Die zurückbleibende Hippursäure wird dann noch aus Wasser umkrystallisiert. 



Bestimmung: Quantitative Bestimmung der Hippursäure im Harn: Eine gemessene 

 Menge Harn wird mit Soda schwach alkalisch gemacht imd auf dem Wasserbade zur Trockne 

 gebracht. Hierauf nimmt man den Rückstand mehrmals mit abs. Alkohol auf, filtriert, ver- 

 dampft den Alkohol, löst den Rückstand des alkoholischen Auszuges in Wasser, säuert mit 

 verdünnter Schwefelsäure an und schüttelt fünfmal mit Essigäther die Hippursäure aus. 

 Die essigätherische Lösimg wäscht man mit Wasser, verdunstet hierauf den Essigäther und 

 wäscht den Rückstand mit Petroläther. Die Hippursäure bleibt ungelöst zurück; man kry- 

 stallisiert sie aus möglichst wenig heißem Wasser um, bringt die Krystalle auf ein gewogenes 

 Filter, extrahiert die Mutterlauge mit Essigäther, verdunstet diesen und vereinigt den Rück- 

 stand des essigätherischen Auszuges mit den Krystallen, trocknet und wägti). — Oder fol- 

 gendes vereinfachte Verfahren: 300 ccm Harn werden mit Soda alkalisch gemacht und zur 

 Trockne verdampft. Der Rückstand wird zweimal mit je 150 ccm 96 proz. Alkohol warm 

 extrahiert und das Filtrat verdunstet, der restierende Sirup wird in 50 ccm Wasser gelöst, 

 mit 10 ccm 20 — 25 proz. Salzsäure oder Schwefelsäure angesäuert und mit je 200 ccm Äther, 

 der 20 ccm 96 proz. Alkohol enthält, ausgeschüttelt. Die vereinigten ätherischen Auszüge, 

 nachdem man viermal extrahiert hat, wäscht man mit 75 ccm Wasser, den Rückstand des 

 Ätherauszuges nach dem Abdestillieren des Äthers löst man in 20 ccm Wasser und bestimmt 

 den Stickstoffgehalt nach dem Kjeldahl verfahren. Die Methode zeigt im Mittel 85% der vor- 

 handenen Hippursäure an 2). — Gegen diese Methode wird geltend gemacht, daß die Be- 

 stimmung der Hippursäure aus dem Stickstoffgehalt im Ätherextrakt des Harns unrichtige 

 Werte liefere, da andere stickstoffhaltige Substanzen, insbesondere Harnstoff, hierin zugegen 

 seiend). Doch soll bei genauer Einhaltung der Vorschrift ein praktisch hamstofffreier Äther- 

 extrakt resultieren. Das Verfahren liefert zwar 15% niedrigere Werte als die Methode von 

 Bunge-Schmiedeberg (s. oben), liefert aber innerhalb einer Versuchsreihe brauchbare 

 Vergleichswerte und ist noch bei solch geringen Mengen anwendbar, wo die Methode der an- 

 deren Autoren versagt*). Man dampft 300 — 500 ccm Harn auf dem Wasserbade auf ca. 100 ccm 

 ein, säuert stark mit Phosphorsäuren an und extrahiert 12 Stunden lang mit Essigester im 

 Extraktionsapparat; der Essigesterextrakt wird alsdann zwecks Entfernung eines Teiles des 

 Harnstoffes 4 mal mit konz. Natriumchloridlösung ausgeschüttelt, mit Wasser gewaschen \md 

 mit Wasserdampf destilliert. Man kocht den wässerigen Rückstand mit Tierkohle, filtriert und 

 läßt erkalten, wobei ein großer Teil der anwesenden Hippursäure auskrystalUsiert; man fil- 

 triert von den Krystallen ab, beseitigt Indolessigsäure und ähnliche Verbindungen durch 

 Ausschütteln mit Benzol + Äther, dampft die wässerige Lösung zur Trockne, vereinigt den 

 Rückstand mit den vorher ausgeschiedenen Krystallen und wägt*). — Zur Bestimmung 

 der Hippursäure und Benzoesäure nebeneinander im Harn ist folgendes Verfahren benutzt 

 worden: 200 — 500 ccm Harn werden mit Mononatriumphosphat schwach angesäuert, auf 

 1/3 — 1/5 eingedampft, zur erkalteten Flüssigkeit einige Kubikzentimeter 20 proz. Schwefelsäure 

 zugegeben, die abgeschiedene Hippur- und Benzoesäure abgesaugt, mit eiskaltem Wasser ge- 

 waschen und nach dem Trocknen gewogen. Diesem Produkt wird hierauf durch Extraktion mit 

 Petroläther die Benzoesäure entzogen, die nach dem Verdampfen des Lösungsmittels in Wägung 

 gebracht wird. Aus der Differenz beider Wägungen ergibt sich die Hauptmenge der Hippursäure. 

 Den Rest der beiden Säuren bestimmt man noch in der wässerigen Mutterlauge. Zu diesem 

 Zwecke wird (nach Fällung mit Ammoniumsulfat) in einem kontinuierlich wirkendenÄtherextrak- 

 tionsapparat erschöpft, der nach dem Verdampfen desÄthers bleibende Rückstand in Natronlauge 

 gelöst, mit Schwefelsäure versetzt und mit Petroläther die freie Benzoesäure extrahiert und 

 gewogen. Die im wässerigen Rückstand bleibende Hippursäure wird durch Kochen mit starker 

 Kalilauge in Benzoesäure verwandelt und nach dem Ansäuern mit Petroläther extrahiert, 

 in Wägung gebracht und auf Hippursäure umgerechnet«). — Um den Gehalt des Harnes 

 an» Hippursäure titrimetrisch festzustellen, wird folgende Methode angegeben : 50 ccm Harn 



1) Bunge u. Schmiedeberg, S. Fränkels Deskriptive Biochemie. Wie.sbaden 1907. S. 232. 



2) F. Blumenthal, Zeitschr. f. kUn. Medizin 40, Heft 3 u. 4 [1900]; Cham. Centralbl. 1900, 



n, 447. 



3) F. Stoehbeer, Zeitschr. f. physiol. Chemie 35, 536 [1902]. 



*) F. Blumenthal u. A. Braunstein, Beiträge z. ehem. Physiol. u. Pathol. 3, 385 [1902]; 

 Chem. Centralbl. 1903, I, 424. 



6) H. D. Dakin, Joum. of biol. Chemistry 7, 108 [1910]; Chem. Centralbl. 1910, I, 1276. 

 6) A. Magnus -Levy, Bioohem. Zeitschr. 6, 523 [1908]. 



