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wird bereitet durch Schütteln von 2 g feingepulverter Sulfanilsäure mit 3 com Wasser und 



2 com konz. Salzsäure imd Eintragen von 1 g frischem Kaliumnitrit in 1 — 2 ccm Wasser in 

 kleinen Portionen unter Kühlimg. Der ausgeschiedene krystallinische Niederschlag von 

 Diazobenzolsulfosäure wird immer frisch in Sodalösung gelöst und zur Prüfung verwendet. 

 Weniger deutlich ist das Verhalten gegen Bromwasser, womit, in der Kälte versetzt, zuerst 

 oft Entfärbung eintritt, und nach weiterem Bromzusatz bleibt ein gelblicher Ton bestehen. 

 Beim Erhitzen entfärbt sich zuerst die Lösung, und falls sie kein freies Alkali oder keinen 

 großen Bromüberschuß enthält, wird sie bald rötlich bis dunkelweinrot. Zuletzt scheiden sich 

 schwarze Flocken ab. In lo/oQ-Lösung ist die Reaktion noch gerade sichtbar, in 1 proz. sehr 

 stark 1). 



Für die quantitative Bestimmung wird Histidin aus der Lösung mit Phosphor- 

 wolframsäure abgeschieden, da aber Lysin und Arginin, die meistens auch anwesend sind, 

 mitgefällt werden, so muß meistens eine Trennung von den beiden letzteren vorgenommen 

 werden 2). Man hydrolysiert bei histidinreichen 2 — 5 g, bei basenarmen Substanzen 40 — 50 g 

 mit 25 proz. Schwefelsäure, entfernt aus der Lösung die Schwefelsäure beinahe vollständig 

 mit Baryt, aus dem Filtrat das Ammoniak durch Kochen mit Magnesia und fällt endlich 

 die Huminsubstanzen durch Zusatz von Baryt bis zur stark alkalischen Reaktion. Das Baryt 

 wird jetzt im Filtrat mit einem Überschuß von Schwefelsäure entfernt und aus der auf etwa 



3 1 verdünnten und filtrierten Lösung Histidin und Arginin als Silbersalze gefällt. Dies ge- 

 schieht durch Versetzen der warmen Lösung, unter Umrühren mit feingepulvertem Silber- 

 sulfat, bis eine Probe der Lösung mit Barytwasser eine gelbe Färbung gibt. Man kann auch 

 zur kalten Lösung eine heiß gesättigte Lösimg von Silbersulfat zusetzen. Jetzt läßt man 

 abkühlen auf 40°, sättigt die Flüssigkeit mit Baryt, saugt den Niederschlag ab, zerreibt ihn 

 mit Barytwasser, saugt wieder ab und wäscht gründlich noch mit Barytwasser nach. Der 

 in schwefelsäurehaltigem Wasser aufgeschlämmte Niederschlag wird mit Schwefelwasserstoff 

 zerlegt, die Niederschläge ausgekocht, die Flüssigkeit mit Barytwasser genau neutralisiert, 

 gelöstes Bariumnitrat zugesetzt, solange noch eine Fällung entsteht, filtriert imd ausgewaschen. 

 Das Filtrat wird auf 300 ccm eingedampft, und nach dem Ansäuern mit Salpetersäure so lange 

 konz. Silbemitrat zugesetzt, bis eine Probe in Barytwasser einen braungelben Niederschlag 

 erzeugt. Jetzt wird mit Barytwasser nochmals schwach sauer oder eben neutral gemacht, 

 aufgeschwemmtes Bariumcarbonat zugesetzt, auf dem Wasserbade erwärmt imd einmal 

 aufgekocht. Der Histidinsilbemiederschlag wird abfUtriert und mit schwach barythaltigem 

 Wasser ausgewaschen, mit Schwefelwasserstoff zerlegt, vom Schwefelsilber abfiltriert imd 

 mit siedendem Wasser vöUig erschöpft. Die vereinigten Filtrate werden nach dem Verjagen 

 des Schwefelwasserstoffs mit überschüssigem Barytwasser versetzt und Kohlensäure ein- 

 geleitet. Nach dem Auffüllen der Lösimg auf 500 ccm wird in einem Teil eine Stickstoff- 

 bestimmimg nach Kjeldahl gemacht, während der übrigbleibende TeU zur Überführung in 

 das Pikrolonat dient. Man löst auf 3 Atome Stickstoff der Lösung etwas mehr als 1 Molekül 

 Pikrolonsäure in Alkohol und fügt sie zu der Lösung des Histidins. Nach dem Eindampfen 

 auf ein geringes Volumen scheidet sich ein reichUcher krystallinischer Niederschlag ab, welcher 

 abfütriert und in 500 ccm siedendem Wasser gelöst wird. Beim Erkalten fällt der allergrößte 

 Teil des Pikrolonates krystallinisch aus. Dasselbe wird auf ein gewogenes Filter gesammelt, 

 das Filtrat auf 15 ccm eingedampft, der nach dem Erkalten ausgeschiedene Niederschlag 

 mit dem ersten vereinigt und gewogen. Man rechnet das erhaltene Pikrolonat mit 1 Mol. 

 Pikrolonsäure 3). Vgl. die Methode von D. D. van Slyke, welche auf der Behandlung mit 

 salpetriger Säure beruht*). 



Physiologische Eigenschaften: Bei dem bakteriellen Abbau von Histidin konnte in 

 großen Mengen yS-Imidazolyläthylamin und werüg Imidazolylpropionsäure gewonnen werden 

 unter folgenden Versuchsbedingungen: 49 g Histidinchlorhydrat wurden in 4 1 Wasser gelöst, 

 mit 10 g Witte-Pepton, 20 g Traubenzucker, einigen Tropfen Magnesiumsulfat und Natrium- 

 phosphat und einem Überschuß an Calciumcarbonat versetzt und 52 Tage bei 35° mit einer 

 Flocke eines frisch zerhackten Rinderpankreas, das 24 Stunden mit wenig stark verdünnter 

 Sodalösung im Brutschrank gestanden hatte, aufbewahrt. Aus der Lösung konnten 53,8 g 



1) F. Knoop, Beiträge z. ehem. PhysioL u. Pathol. II, 356 [1908]. 



2) A. Kossei u. F. Kutscher, Zeitschr. f. physiol. Chemie 31, 164 [1900/01]. 



3) A. Kossei u. H. Pringle, Zeitschr. f. physioL Chemie 49, 318 [1906]. — E. Weiß, Zeitschr. 

 f. physiol. Chemie 52, 112 [1907]. 



*) D. D. van Slyke, Berichte d. Deutsch, ehem. Gesellschaft 43, 3170—3181 [1910]. 



