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Zusatz, luifjrescliichtet, die Gläser bei oleicher Temperatur aufbewahrt 

 und in bestimmten Zeitintervallen die Höhe der verflüssigten (u'latine- 

 schicht mit dem MaListab gemessen. — 2. Für {genaue Best im m iino^en 

 emptiehlt es sich. Fibrin oder koa,i:nliertes HühnereiweiÜ als Prüt'iings- 

 objekt zu wählen und die Menge des oeli»sten Stickstotles zu bestimmen. 5 

 ]\Ian bringt abgewogene Mengen Fibrin in abgemessene Giengen der 

 enzymhaltigen Flüssigkeit, digeriert bei 87 ". erhitzt die Flüssigkeit zum 

 Sieden, neutralisiert genau (zweckmäßig unter Zusatz von 5—10 ccm 

 konzentrierter Kochsalzlösung auf 100 ccm Flüssigkeit), füllt auf ein 

 bestimmtes Volumen auf, liltrieit durch trockene Filter und bestimmt 10 

 in einem aliciuoten Teil des Filtrates den Stickstoff nach K.ikldahl. 

 Handelt es sich um eine Knzymlösung, die selbst größere Giengen von 

 koagulierbarem Eiweiß enthält, wie die Preßsäfte aus Bakterien, so ist 

 der Fibrinzusatz unnötig. Man bestimmt einfach vor und nach der Di- 

 gestion unter Innehaltung des beim Fibrin angegebenen Verfahrens die 15 

 Menge des in Lösung gegangenen Stickstoffs. Selbstverständlich kann 

 man auch statt dessen die Menge des ungelösten Fibrins oder Eiweiß 

 bestimmen, indem man dasselbe nach Koagulation auf einem gewogenen 

 Filter sammelt, wäscht und wägt. Die hier erwähnten Versuchsanord- 

 nungen können in gleicher Weise zum Nachweis der proteolj'tischen 20 

 Endoenz^'me und der Ectoenzyme benützt werden. 



Die Beschreibung der Darstellung der proteolytischen Enzyme 

 soll bei den Ectoenzymen beginnen. Die einfachste ^Methode, um zu 

 relativ reinen Präparaten zu gelangen, ist die Alkoholfälhing. die von 

 EiETscH (1) und Fermi angewandt wurde. "Will man eine Beimengung 25 

 von fremden Eiweißkörpern nach Möglichkeit vermeiden, so züchtet man 

 die betreffenden Bakterienarten auf eiweißfreien Nährböden, was aber 

 nicht immer angängig ist; sonst geht man von gewöhnlichen Bouillon- 

 kulturen aus. Man fällt die etwa achttägigen Kulturen mit dem 8 — 10- 

 fachen Volumen Alkohol nach vorhergegangener Konzentration im Va-30 

 kuum, filtriert den Niederschlag ab und wäscht wiederholt mit absolutem 

 Alkohol, eventuell noch mit Aether r.nd zerreibt den Niederschlag zu 

 einem feinen, trockenen Pulver. Dieses letztere enthält natürlich auch 

 eine Menge anoi-ganischer Salze, die aus der wässerigen Lösung des 

 Pulvers größtenteils durch Dialyse entfernt werden können. Die Enzyme 35 

 diffundieren nach FEinii (1) nicht. Zweckmäßig gestaltet man ^ die 

 Alkoholbehandlung möglichst kurz, weil sonst die Enzj'me geschädigt 

 werden und auch die Wasserlöslichkeit des Niederschlags beeinträchtigt 

 wird. Schonender scheint noch die Fällung mit Aceton zu sein (s. 14. Kap. 

 d. IV. l^ds.). Da manche Bakterienarten durch die Alkohol- bzw. Aceton- 40 

 behandlung nicht getötet werden, so muß man. um die Wirkung leben- 

 der Baktei-ien aus dem Trockenpräi)arat auszuschalten, gegebenenfalls 

 vor der Konzentration und Alkoholbehandlung die Flüssigkeiten durch 

 Ton- oder Kieselgurfilter keimfrei filtrieren oder aber den völlig trockenen 

 Alkohol- oder Acetonniederschlag auf 120" erhitzen, was ohne wesent-45 

 liehe Schädigung der i)roteolytischen Enzyme in den meisten Fällen ge- 

 schehen kann (s. u.). Ganz reine Präparate der P2nzyme lassen sich 

 selbstverständlich auf diesem Wege niclit gewinnen, wohl aber aus dem 

 Alkoholniederschlag konzentiierte P^nzynilösnngen darstellen. — Zum 

 Zwecke der Darstellung von proteolytischen Endoenzymen züchtet 00 

 man gr(»ßere Mengen von Bakterien auf mit Agar gefüllten Kolleschalen, 

 hebt die feuchten Bakterienmassen mit dem Spatel ab oder spült sie 

 mit Hilfe von steriler Kochsalzlösung ab, die man durch Centrifugieren 



