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tubes de culture à l'autoclave, après avoir versé préalablement à la sur- 

 face du milieu une couche peu épaisse d'huile de vaseline. La tempé- 

 rature de 120 degrés agit, à la fois, en stérilisant le milieu de culture et 

 en chassant l'air qu'il contient; la couche d'huile de vaseline ne permet 

 pas ultérieurement la rentrée de cet air. 



Si le milieu de culture est très sensible à l'action de la chaleur 

 (bouillons sucrés, additionnés de sérum, de liquide d'ascite, etc.), il 

 suffît pour assurer l'anaérobiose, après avoir distribué avec précaution 

 dans un vase de culture stérile le milieu liquide (ou liquéfié) préparé ou 

 recueilli aseptiquement et l'avoir recouvert d'une couche d'huile de 

 vaseline stérilisée, de mettre le vase de culture en relation avec une 

 trompe et de faire le vide. En plongeant ce vase dans l'eau tiède, 

 l'ébullition se fait à basse température et l'air est chassé. 



Pour pratiquer l'ensemencement dans les deux cas, il faut se servir 

 de pipettes plus ou moins longues. 



Cette technique s'applique aussi bien aux cultures en milieux liquides 

 qu'à l'isolement sur milieux solidifiables. Dans ce cas, on devra préparer 

 une dilution convenable du produit à étudier dans un liquide stérilisé, 

 privé d'air par ébullition et refroidi brusquement ensuite. L'ensemen- 

 cement sera fait dans le délai le plus rapide au moyen d'une pipette. 



En faisant usage de cette technique, nous avons pu cultiver facilement 

 sur divers milieux le vibrion septique, le bacterium Chauvœi, le bacille 

 du tétanos. Les élèves qui suivent nos cours ont pu réussir d'emblée 

 des cultures de ces microbes, alors qu'ils échouaient généralement par 

 l'emploi des procédés plus compliqués. 



Cette méthode convient tout spécialement à la préparation en grand de 

 la toxine tétanique. Avec un milieu de culture contenant, pour cent 

 parties d'eau, 2 grammes de peptone, 1 gramme de gélatine et 50 cen- 

 tigrammes de sel marin, nous obtenons régulièrement, en six à dix jours, 

 une toxine tétanique active au dix ou vingt millième de centimètre cube 

 pour la souris. Cette méthode nous paraît constituer le procédé de choix 

 pour la préparation de cette toxine. 



Nous avons pu constater en l'employant que le bouillon préparé 

 dans ces conditions et conservé pendant six mois à l'abri de la lumière 

 est tout aussi favorable pour le développement du bacille tétanique et 

 la production de sa toxine que le bouillon frais. 



L'emploi de l'huile de vaseline nous paraît devoir être généralisé dans 

 les laboratoires. En suivant la technique que nous venons d'indiquer, 

 on pourra préparer à l'avance et conserver indéfiniment une provision 

 d'un milieu de culture de composition déterminée. Or, il est souvent 

 nécessaire, pour certaines recherches, d'employer toujours un milieu 

 identiquement semblable. C'est toujours sous l'huile de vaseline qu'on 

 devra recueillir les toxines microbiennes ; en les privant d'air à la trompe 

 (ainsi que nous faisons pour les milieux sensibles à la chaleur), il n'est 



