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den Fis eher in seinem Buche (Fixirung, Färbung und Bau des Protoplasmas, 1899) vertritt. Es giebt selbst- 

 verständlich Färbungen, die nur durch Adsorption zu Stande kommen, aber ebenso sicher beruhen viele, kurz 

 gesagt, auf Lösung (z. B. Aufnahme von Fettfarbstoffen durch Fette), sehr viele Intensivfärbungen auf 

 chemischer Bindung. Ich verweise auch auf die Abhandlung von Heidenhain ,1902) und mache darauf 

 aufmerksam, dass auch Zacharias (1900, S. S) eine der meinen ähnliche Auffassung vertritt. 



Die Reaction I ist für die Untersuchung des Protoplasten deshalb so werthvoll, weil sie das Cyto- 

 plasma, das fette Oel, die Stärke ebensowenig theilen wie die Proteinkrystalloide der Samen und die Pyre- 

 noide. Ich habe die Aleuronkörner verschiedener Samen, die Cyanophycinkörner von Oscillaria, die Pyre- 

 noide von Micrasterias etc. untersucht. 



Die Zellkerne entfärben sich meist bei Behandlung mit I Xiger Schwefelsäure vollständig, selten 

 bleiben die Nucleolen [Micrasterias) hellblau gefärbt, noch seltener erhält sich der ganze Zellkern in l^iger 

 Schwefelsäure in hellblauer Färbung (Coleochaete). Stets entfärben sich alle diese Gebilde, im Gegensatz zum 

 "Volutin, wenn man ganz kurze Zeit ö^ige Schwefelsäure auf das Präparat einwirken lägst. In manchen 

 Fällen ist es vortheilhaft, die Objecte vor Anstellung der Reaction zu flxiren, dann kann man vorher 

 10 Minuten lang Formol (40^ige Formaldehydlösung) auf die Objecte einwirken lassen. Ich habe diese 

 Methode eingehend an Bacillus alvei geprüft und will diese Formol-Methylenblau-Schwefelsäure-Methode 

 als Reaction 1 f bezeichnen. 



Einige Verbindungen, die mit Methylenblau sich färben, z. B. Gerbsäure, schliesst man bei dieser 

 Reaction von vorn herein aus, wenn man die Objecte vor Ausführung der Reaction I mit Alcohol extrahirt. 



Reaction II. Methylenblau-Jodjodkalium-Natriumcarbonat. 



Färbt man eine lebende oder mit Formol (Reaction Ilf) 10 Minuten lang behandelte Zelle intensiv 

 mit Methylenblau \-\- 10 und setzt man nach Absaugen der Farbstofflösung Jodjodkalium seh. (Praktikum 

 1903, S. 152; hinzu, so färbt sich der Protoplast gelb bis braun, die Volutinmassen schwärzlich. Die Färbung 

 des Volutins verschwindet nun nicht, wenn man nach Absaugen des Jodjodkaliums ö^ige Natriumcarbonat- 

 lösung zum Objecte hinzufügt. Nur langsam verblasst die Farbe des Yolutins, und zuletzt sieht man an Stelle 

 derselben nur eine schwächer lichtbreehende Partie im Cytoplasma, weil die 5Xige Natriumcarbonat- 

 lösungdas Volutin, nach Zersetzung der Farbstoffverbindung, bei den kleinen Bacterienzellen schon nach 

 fünf Minuten löst. 



Die Reaction ist leicht zu verstehen. Das Methylenblau setzt sich mit dem Jodjodkalium zu 

 dem Jodhydrat des Methylenblaus C lfi N ls N 3 SJ) um. Jodmethylenblau ist ein dunkelbrauner Körper, welcher 

 sich in Natriumcarbonatlösung nur langsam verändert. Ebenso zersetzt Natriumcarbonat die Verbindung 

 des Volutins mit dem Jodhydrat des Methylenblaus langsam und löst dann erst das Volutin. 



Im Allgemeinen ist über diese Methode noch Folgendes zu bemerken. Die Reaction ist für das 

 Volutin ähnlich charakteristisch wie die Reaction I, da viele andere Bestandtheile bei dieser Methode nach 

 Zusatz des Natriumcarbonates schnell entfärbt werden. Manchmal entfärben sich bei dieser Reaction die 

 Membranen besser als bei Reaction I. Störend ist das Verhalten der Stärke, welche sich bei der Reaction 

 mehr oder weniger intensiv färbt. Auch die Pyrenoide {Micrasterias, Coleochaete) färben sich blau. 



Reaction III. Carbolfuchsin — \%\ge Schwefelsäure (Neisser'sche Färbung, 1888). 

 Färbt man ein angetrocknetes Präparat mit Carbolfuchsin (siehe Praktikum 1903, S. 152) kräftig 

 durch, so erscheint bei dickeren Objecten alles tief roth. Entfernt man den Ueberschuss des Farbstoffes 

 durch Abwaschen mit Wasser und setzt dann l^ige Schwefelsäure hinzu, so entfärben sich Cytoplasma, 

 Zellkern etc. mehr und mehr, während die Volutinmassen fast schwarz, in eigenartigem Farbton hervortreten. 

 Setzt man 5Xige Schwefelsäure hinzu (Reaction III s), so verschwindet die Färbung des Volutins 

 langsam, und an Stelle des Volutins bleibt eine Vacuole zurück. 



Reaction IV. Lösung des Volutins mittelst siedenden Wassers. 

 Das Bacterien-Volutin löst sich in kochendem Wasser schnell, wenn man das Deckglas mit dem 

 angetrockneten Bacterienmaterial in siedendes Wasser hält. Bei anderen Objecten dauert es manchmal 

 länger, bis die Lösung aus der entstehenden Höhlung des Cytoplasmas herausgeschafft ist. Immer genügen 

 fünf Minten langes Kochen der Objecte. Batrachospermum muss man z. B. in einem Schälchen fünf Minuten 

 lang kochen. Das Mycel von Penicillium glaueum und die Oidien von Ustilago avenae geben das Volutin bei 

 einmaligem Aufkochen ab. 



