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Il G r i e b ( ! ) operò nel seguente modo : « Il tubo digerente lavato ben bene 

 con acqua distillata lo porto direttamente in una soluzione di cloruro d'oro 1 % 

 lasciandovelo da cinque a sette minuti primi, dopo dei quali passo l' organo diret- 

 tamente nella soluzione composta di quattro parti d' acqua distillata, ed una di 

 acido formico puro , lasciandolo per 24 ore all' oscuro ». Io invece lasciai i pezzi in 

 cloruro d' oro un tempo alquanto superiori (10-12 minuti), di più osservai che, dopo 

 un soggiorno di 30-40 ore in acido formico, cambiato almeno un paio di volte , la 

 riduzione è assai più completa. Anche per il metodo Grieb è utile esporre i pre- 

 parati già dilacerati alla luce solare per qualche minuto. Questo metodo non serve 

 per il bulbo anche ridotto in pezzetti minutissimi, poiché il cloruro d'oro non riesce 

 a penetrare che superficialmente , quindi la reazione è sempre imperfetta. Ho pro- 

 vato invece a lasciare il bulbo da 12-24 ore in una soluzione dell' uno per mille 

 di cloruro d'oro e poi immergerlo direttamente in abbondante acido formico, i ri- 

 sultati ottenuti furono assai più soddisfacenti, ma in tal caso, le esili fibrille ner- 

 vose non si colorano affatto. 



e) — Metodo Golgi. — Questo metodo fu applicato ai Gasteropodi dal Tr am- 

 busti ( 2 ), ed infatti dà ottimi risultati, sia mantenendolo come lo ha saggerito il 

 Prof. Golgi, sia modificandolo alquanto come fece il Trambusti, cioè espo- 

 nendo i preparati a luce diffusa e non a luce solare. 



d) — Provai anche il secondo metodo R a n v i e r, consistente nell' immergere 

 i pezzi per 20 minuti ad un' ora in una miscela bollita e raffreddata di cloruro 

 d'oro al 1 °/ (4 parti) e di acido formico puro (una parte), ma non trovai una ri- 

 duzione maggiore che nei metodi precedenti. 



Oltre ai metodi a base di cloruro d'oro applicai quelli preconizzati dal Golgi 

 a base di bicromato potassico e di nitrato d' argento. 



e) — Reazione nera. — 1.°) Metodo rapido. — I pezzi, dopo esser stati 4-6 

 giorni in una soluzione di bicromato potassico 3 °/ e di acido osmico 1 % nelle 

 proporzioni di quattro ad uno , vengono lavati con nitrato d' argento e tenuti in 

 nitrato fresco per 24 ore almeno ed allo scuro. Oltre che gli elementi nervosi in 

 generale restano impregnate in nero numerose fibre muscolari, il connettivo e l'e- 

 pitelio. Degli elementi nervosi i grossi tronchi, e le cellule nervose difficilmente 

 sono colorate, invece appaiono tinte in nero più o meno intenso, gli ultimi rami, 

 le fibrille terminali e le terminazioni. Migliori risultati si hanno col metodo del : 



2.°) Ringiovanimento , col quale ottenni 1' impregnazione anche dei grossi 

 tronchi ed una ricchezza considerevole di terminazioni nervose. 



3.°) La doppia impregnazione presenta dei vantaggi e degli svantaggi note- 

 volissimi I grossi tronchi si colorano più completamente, ma viceversa si colorano 

 anche gli altri elementi anatomici talvolta in così grande numero e con sì abbon- 

 dante precipitato da rendere difficile l'osservazione e quasi impossibile l'interpre- 

 tazione. 



f) — Oltre a questi metodi adoperai il carmino, l'ematossilina e l'acido osmico 

 per lo studio istologico dei nervi, mentre per lo studio macroscopico seguii il me- 

 todo preconizzato da Viallanes che mi diede ottimi risultati. Si pone il canale 

 digerente per 24 ore in una miscela di aceto comune e di alcool a 90% (ana), po- 

 scia lo si trasporta in trementina e quivi si abbandona per altre 24 ore. Infine si 

 lava ripetutamente in acqua distillata, e vi si lascia per oltre 5-6 ore , affinchè la 

 reazione avvenga completamente; infine si procede alla dilacerazione, tenendo il 



(*) Grieb. — Op. cit. pag. 3. 



( 2 ) Trambusti. — Op. cit. pag. 2. 



