Coloration des spores des Ascomycètes, et en particulier 

 des ascospores des Levures, par la méthode de Qram, 



Par M. F. GUÉGUEN. 



Ayant eu l'occasion d'examiner une petite levure en sporula- 

 tion, nous avons essayé d'en colorer les spores à l'aide du pro- 

 cédé de Wasserzug (1). Cette méthode, comme on le sait, con- 

 siste essentiellement à traiter par l'acide nitrique étendu la 

 levure préalablement colorée au bleu de méthylène ; après l'ac- 

 tion de l'acide, les spores seules restent colorées, et sont ainsi 

 mises en évidence. 



Cette technique nous ayant donné des résultats inconstants, 

 nous avons tenté avec succès de la remplacer par le procédé 

 connu en bactériologie sous le nom de méthode de Gram. Nous 

 résumerons ici les détails de l'opération telle que nous l'avons 

 pratiquée : 



Une parcelle de levure étant délayée dans de l'eau faiblement 

 albumineuse, on étale une gouttelette de cette émulsion au 

 centre d'un porte-objet. La préparation, séchée à une douce 

 chaleur, puis fixée à l'alcool-éther (2), est colorée à chaud avec 

 une solution étendue de violet de gentiane (solution alcoolique 

 saturée, allongée de quinze à vingt volumes d'eau distillée). On 

 fait ensuite agir à froid, pendant une minute environ, la solu- 

 tion iodo-iodurée de Gram ; on lave à l'alcool-acétone, puis à 

 l'eau; on recolore avec l'éosine ou la vésuvine, et l'on monte au 

 baume après déshydratation. Les spores, colorées en violet 

 foncé, se détachent nettement sur un fond rose ou brun. 



Nous avons appliqué ce procédé à la coloration des spores de 



(1) Wasserzug. (Bull. Soc. Bot. Fr., 1888, p. 152). 



(2) Comme l'a fait remarquer Wasserzug, l'alcool-éther, en même 

 temps qu'il fixe le contenu des cellules, entraîne les gouttelettes grasses 

 que l'on rencontre dans les vieux globules de levure, et qui souvent peu- 

 vent être prises pour des ascospores, d'autant mieux que ces dernières, 

 dans un même asque, sont quelquefois de dimensions inégales. 



