M. Bleibtreu u. E. Atzler: Beitrag zur Darstellung u. Kenntnis des Thrombins. 131 



Monate stehenlassen, Niederschlag abfiltrieren und trocknen; Extrak- 

 tion des Fermentes aus dem getrockneten Pulver mit Wasser. 



Die auf diese Weise gewonnenen Fermentlösungen haben den Vorzug, 

 daß sie nur wenig fremde Beimengungen enthalten, weil durch das lange 

 Stehen unter Alkohol die gefällten Eiweißsubstanzen in Wasser immer 

 unlöshcher werden. Das Verfahren hat aber den Nachteil, daß es sehr 

 zeitraubend und wegen der großen Alkoholmenge sehr kostspiehg ist. 



Schon seit längerer Zeit versuchte der eine von uns (B.) eine Ab- 

 trennung des Thrombins, welches — was es auch immer sei — jedenfalls 

 Kolloidcharakter besitzt, dadurch zu erzielen, daß es, an andere Kolloide 

 gebunden, ausgeflockt wurde, worauf, wenn es gelang, allerdings noch 

 die weitere Aufgabe folgte, es nach Möghchkeit aus der Adsorptions- 

 verbindung mit dem fremden Kolloid wieder zu lösen. 



Nach mehreren fruchtlosen Versuchen mit Eisenhydroxyd, Alu- 

 miniumhydroxyd und anderen, wurde festgestellt, daß eine Bindung 

 des Fermentes an kolloidale Kieselsäure stattfindet, und daß dasselbe 

 mit dieser ausgeflockt werden kann. 



Die Lösung der kolloidalen Kieselsäure wurde auf folgende Weise 

 hergestellt: Käufliches Wasserglas wurde auf das 10 — 20fache mit 

 Wasser verdünnt, mit Salzsäure bis zu saurer Reaktion auf Kongopapier 

 versetzt, und dann längere Zeit gegen Wasser dialysiert. 



Wird Blutserum mit dem vierten Teil seines Volumens dieser Lösung 

 versetzt, so tritt eine starke Flockung ein, die oft (wenn auch nicht im- 

 mer) bald filtrierbar wird. Man erhält dabei ein klares Filtrat. Wenn 

 man dieses Filtrat auf seine ,,fermentative" Wirksamkeit untersucht, 

 so findet man, daß dieselbe gegenüber der des ursprünglichen Serums 

 stark herabgesetzt oder sogar ganz verschwunden ist. 



Nun ist bekanntlich der Gehalt des Blutserums an wirksamem 

 Thrombin überhaupt nicht sehr groß, und er nimmt beim Stehen des 

 Serum schnell weiter ab. Es verwandelt sich in das unwirksame Meta- 

 thrombin (Morawitz), ist vielleicht auch schon in dem ganz frischen 

 Serum zum Teil in dieser Form vorhanden. Durch AJkahschmachen 

 und darauf folgende Neutralisation kann das Metathrombin leicht wieder 

 in wirksames Thrombin umgewandelt werden. 



Es war daher das Filtrat nicht nur in dem ursprünglichen, sondern 

 auch in dem aktivierten Zustande zu untersuchen und mit dem ebenfalls 

 aktivierten Serum zu vergleichen. Dabei zeigte sich, daß auch das 

 aktivierte Filtrat seine fermentative Wirksamkeit verloren hatte. 



Als Beispiel möge folgender Versuch angeführt sein; 



200 ccm Rinderblutserum. 



50 ccm der genannten kolloidalen Kieselsäurelösung. Von der Flockung ab- 

 filtriert. Proben des Filtrates mit gleichen Teilen Oxalatplasma versetzt, gerinnen 

 nicht. Das Filtrat durch Alkalisäurebehandlung aktiviert gibt mit Oxalatplasma 

 ebensowenig Gerinnung. . 



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