Beitrag zur Darstellung- und Kenntnis des Thrombins. 133 



Bindung des Fermentes an Kaseinniederschlag. 



Vorversuche. 



Als Ausgangsmaterial verwandten wir frisches Rinder serum. Zu 

 100 ccni desselben wurde je 1 g trockenes Casein zugesetzt. Das Casein 

 wurde nach Hammarsten aus Kuhmilch frisch bereitet. Das Casein 

 löst sich in dem Serum bei heftigem Schütteln meist vollständig auf. 



Das so zubereitete Serum ließen wir zuerst 12 — 24 Stunden stehen, 

 im Verlauf der weiteren Untersuchungen stellte sich aber heraus, daß 

 die Weiterverarbeitung auch sofort erfolgen kann. Durch vorsichtigen 

 Zusatz von 30proz. Essigsäure wurde das Casein gefällt und mit Hilfe 

 der Zentrifuge oder durch Filtration von dem Serum getrennt. Die 

 Fällung trocknete im Exsikkator zu einer glasigen Masse ein, die im 

 Mörser fein zerrieben wurde. Dieses Pulver wird im folgenden kurz als 

 „Serumcasein" bezeichnet. 



Es war nun die Frage, ob an das ausfallende Casein sich das Thrombin 

 bzw. das Meta thrombin gebunden hatte. Es wurde daher zunächst 

 ^vieder das Filtrat untersucht und mit dem ursprünglichen Serum ver- 

 glichen, beide, nachdem sie durch Zusatz von Normalnatronlauge bis 

 zu einem Gehalt von Yio^^rmal alkalisch gemacht, nach ein bis zwei 

 Minuten mit Yio Salzsäure neutrahsiert (bis zur neutralen Reaktion auf 

 Lackmuspapier) und dadurch aktiviert worden waren. Als Substrat für 

 die Wirkung des Fibrinfermentes diente Oxalatplasma. Die Zeit, die 

 bis zum Beginn der Gerinnung verstrich, wurde mit der Stoppuhr, ge- 

 messen. Diese., wie alle folgenden Gerinnungs versuche, wurden bei 

 Zimmertemperatur vorgenommen. 



Bei diesen Versuchen ergab sich folgendes: 



2 ccm des aktivierten Ausgangsserums zeigten mit 2 ccm Oxalat- 

 plasma versetzt den Anfang der Gerinnung nach 2 — 6 Minuten, das 

 aktivierte Filtrat von der Caseinfällung nach Ya — IV2 Stunden. 



Durch die Caseinfällung hat also die gerinnungsfördernde Wirkung 

 des Serums bedeutend abgenommen. Es lag demnach nahe anzunehmen, 

 daß das Casein das Metathrombin adsorbiert hatte; in der Tat be- 

 stätigte sich diese Annahme. 



Die getrocknete und gepulverte Caseinfällung wurde in Wasser 

 verrieben; das Wasser zeigte dabei saure Reaktion (von noch anhaf- 

 tender Essigsäure). Es wurde zunächst n-Xatronlauge bis zu neutraler 

 Reaktion auf Lackmuspapier zugesetzt, wobei das Casein beim Verreiben 

 sich größtenteils auflöst, dann weiter n-Natronlauge zum Zweck des 

 Aktivierens bis zu V^^ n zugesetzt und nach 1 — 2 Minuten mit "/j-Salz- 

 säure unter fortwährendem Verreiben soweit neutralisiert, daß das 

 Casein noch gerade in Lösung blieb. Mit gleichen Teilen Oxalatplasma 

 versetzt, erfolgte die Gerinnung nach 3 — 5 Minuten. Ohne die Ak- 

 tivierung durch Alkali-Säurewirkung gab die Lösung des Serumcaseins 



