Beitrag- zur Darstellung- und Kenntnis des Thrombins. 135 



Resultate erhielten wir aber, als wir das Michaelis - Ronasche Ver- 

 fahren^) der Entei weißung von Serum in einer für unsere Zwecke ge- 

 eignet erscheinenden Abänderung anwandten. Wir verrieben 5 g 

 ,,Serumcasein" in 25 ccm Wasser, fügten Normalnatronlauge bis zur 

 Neutrahsation hinzu, aktivierten mit 2,5 ccm n-Natronlauge, verdünnten 

 mit 25 ccm Wasser und neutralisierten nach 2 Minuten mit n-Salzsäure. 

 Alsdann wurden 8 ccm aufs 3 fache verdünnte kolloidale Eisenhydroxyd- 

 lösung (Liqu. Ferri oxyd. dialys. Kahlbaum) zugesetzt, geschüttelt 

 und weiter 1 ccm gesättigte Magnesiumsulfatlösung zugefügt. Es trat 

 eine Flockung ein; der Niederschlag "wurde durch Zentrifugieren ent- 

 fernt; das so gewonnene trübe Filtrat bewirkte nach 1 — 5 Minuten im 

 Oxalatplasma Gerinnung. 



Diese Reihenfolge der einzelnen Prozeduren mußte innegehalten 

 werden. So erhält man nach unseren Erfahrungen ein unwirksames 

 Präparat, wenn die Fällung mit dem kolloidalen Eisen direkt nach dem 

 Aktivieren mit Natronlauge und vor dem Neutralisieren mit Salzsäure 

 vorgenommen wurde. Auch spielte bei diesen Versuchen die Menge der 

 zugesetzten Eisenlösung eine große Rolle. Fügte man dem nach der 

 Eisenfällung gewonnenen trüben Filtrat wiederum einige Kubil^enti- 

 meter Eisenlösung zu, so erhielten wir durch Filtration eine wesent- 

 lich geringer getrübte Lösung, die sich aber als weniger aktiv er-wies. 

 Durch mehrmalige Wiederholung dieser Eisenbehandlung konnten wir 

 schließlich ein absolut klares, aber völlig unwirksames Filtrat erhalten. 



Es erwies sich also eine teilweise Ausfällung der Serumcaseinlösung 

 am vorteilhaftesten. Bei der Eisenfällung in dieser dosierten Form 

 wird nun zwar ein Teil der in dem ,,Serumcasein" enthaltenen, dem 

 Ferment anhaftenden Substanzen beseitigt, ein großer, sogar der größte 

 Teil derselben bleibt aber noch darin. Die so gewonnenen Ferment- 

 lösungenwaren also noch mit einer großen Menge fremder Stoff e behaftet. 

 Auch hatten sie den Übelstand, daß sie, frisch bereitet, zwar ziemlich 

 wirksam waren, nach einigen Tagen aber an Aktivität einbüßten. 



Es handelte sich also weiter darum, von den durch das beschriebene 

 Verfahren erhaltenen Lösungen die anhaftenden Eiweißsubstanzen 

 möglichst zu entfernen. Dies gelingt bis zu einem gewissen Grade durch 

 fraktionierte Ausfällung mit Alkohol. Wir fügten zu den Lösungen 

 Va — V2 Volumen Alkohol. Das gibt in der (magnesiumsulfathaltigen) 

 Lösung aufs neue eine starke Fällung, von der abfiltriert wurde. 



Diese Filtrate waren nur schwach getrübt. Um die Konzentration 

 des Alkohols herabzusetzen, wird das Filtrat noch mit dem gleichen 

 Volumen destillierten Wassers versetzt und so schließlich eine Ferment- 

 lösung erhalten, welche, mit gleichem Volumen Oxalatplasma versetzt, 

 in 35 — 60 Sekunden Gerinnung hervorruft. 



1) Biochem. Zeitschr. T, 329. 1908; 13, 122. 1908. 



