Beitrag zur Darstellung und Kenntnis des Thrombins. 139 



Bei Pj[ = 8 trat in der anodischen Seitenflüssigkeit nach 8, 12 und 

 14 Minuten Gerinnung ein; das Serum der Mittelflüssigkeit wirkte nach 

 3,1 und 3 Minuten. Die kathodische Seitenflüssigkeit erwies sich als 

 vollkommen unwirksam. (3 Versuche). 



Um im Bereich Pg- = 6 arbeiten zu können, wurde das Serum der 

 Mittelflüssigkeit mit Salzsäure angesäuert. Nach Herstellung von Puf- 

 fern gleicher [H'J, wurde die Überführung versucht. Es konnte aber 

 keine Überführung des Ferments beobachtet werden. Die mit Salz- 

 säure angesetzte Mittelflüssigkeit bewirkte nach 1^/^ Stunde und in 

 einem zweiten Falle nach 6 Minuten Gerinnung. 



Wurde das Serum der Mittelflüssigkeit durch Zusatz' von Natron- 

 lauge alkalisch gemacht und auf eine P^ ==9,5 gebracht, so trat eben- 

 falls keine Kataphorese ein; berücksichtigt man aber, daß auch das 

 Serum der Mittelflüssigkeit erst nach 20 Stunden Gerinnung auslöste, 

 so ist wohl anzunehmen, daß das Metathrombin den Laugenzusatz nicht 

 verträgt. 



Aus diesen Versuchen kann man also den Schluß ziehen, daß bei 

 einer [H'] von P^ = 8 der Komplex Eiweiß + Metathrombin dissoziiert 

 und daß die Thrombinkomponente eine negative Ladung trägt. Ob 

 bei Pj[ = 6 eine Umladung erfolgt, kann aus den wenigen bisher ange- 

 stellten Versuchen noch nicht geschlossen werden. 



Nun wissen wir aber^), daß der isoelektrische Punkt für Casein 

 bei 2,5 X 10"^ liegt und daß die Kieselsäure ebenfalls anodisch wandert. 

 Daraus folgt, daß wir nicht berechtigt sind anzunehmen, daß beim Lösen 

 des Caseins im Serum die Thrombinkomponente vermöge ihrer entgegen- 

 gesetzten Ladung an Casein adsorbiert wird; ob die Adsorption erst 

 beim Ausfällen des Caseins mit Essigsäure stattfindet und ob dabei die 

 elektrische Ladung eine Rolle spielt, mag dahingestellt bleiben. 



Wir untersuchten nun weiterhin das Verhalten einer nach unserer 

 'Methode gewonnenen Thrombinlösung im elektrischen Potentialgefälle. 

 Leider stellte sich bei der elektrometrischen Bestimmung der [H"] 

 der Fermentlösung die Wasserstoff elektrode auf kein genügend kon- 

 stantes Potential ein. Wir mußten infolgedessen auf die Einschaltung 

 von Puffern verzichten und begnügten uns mit destilliertem Wasser 

 als Seitenflüssigkeit. Das spezifische Gewicht der Thrombinlösung wurde 

 durch Beimengung von Traubenzucker — den wir als indifferent er- 

 kannt hatten — größer als 1 gemacht. 



Wir brauchten nach der Überführung natürlich nicht erst zu ak- 

 tivieren, sondern konnten die verschiedenen Flüssigkeiten zu gleichen 

 Teilen Plasma direkt zusetzen. Die kathodische Seitenflüssigkeit ergab 

 keine Gerinnung, in der anodischen Seitenflüssigkeit trat nach 20 Mi- 

 nuten, in der Mittelflüssigkeit (Thrombinlösung) nach 7 Minuten Ge- 



1) L. Michaelis und H. Pechstein, Biochem. Zeitschr. 41, 260, 3/4. 



