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bout de quelques semaines, tous les Bacilles gardent le Ziehl ou 

 rEhilich (i). 



En examinant à intervalles répétés des cultures homogènes en 

 eau peptonée glycérinée (peptone Poulenc i, glycérine 5, eau loo), 

 milieu très favorable à la croissance du Bacille, j'avais pu consta- 

 ter que, par la méthode ordinaire de Ziehl, la proportion des Ba- 

 cilles non acidorésistants d'une même culture augmentait à cer- 

 tains moments, aussi bien dans les premiers jours qu'au bout de 

 plusieurs semaines. Je me suis alors demandé si ces variations 

 n'étaient pas en rapport avec des modifications survenant dans le 

 milieu nutritif lui-même et, me proposant d'étudier celles-ci, j'ai 

 tout d'abord essayé, sur mes cultures, différentes techniques de 

 coloration dans le but de choisir celle qui me donnait les résultats 

 les .plus sûrs. 



Au cours de ces recherches préliminaires, je fus surpris de 

 constater que des étalements de la même goutte de culture soumis 

 à des fixations différant l'une de l'autre par l'emploi de l'alcool 

 ou de la chaleur plus ou moins forte, me donnaient des résultats 

 tout à fait opposés. L'alcool introduisant dans la technique un 

 facteur important de modification, je me suis borné à étudier 

 quelle était l'action de la chaleur de fixation sur la colorabilité de 

 mes cultures. 



Voici comment j'ai sérié mes recherches : 



a) Milieux de cultures. — Outre le milieu signalé plus haut, 

 j'ai employé les formules suivantes : i° Peptone Poulenc i, man- 

 nite I ou 2, eau loo ; 2° Peptone Poulenc i, glucose 1, eau 100 ; 

 3° Milieu de Calmette, Massol et Breton (2). Le Bacille de Koch 

 « homogène » se développe bien dans ces différents milieux, mais 

 ceux qui ne contiennent pas de glycérine donnent des Bacilles 

 plus grêles et plus courts. Les tubes en expériences sont agités 

 chaque jour. 



b) Etalement des préparations. — J'ai utilisé d'abord l'étale- 

 ment direct de la culture. M'étant aperçu que, par la chaleur forte, 

 les lames à milieu glucose subissaient un début de caramélisation 

 qui, si peu visible qu'il fût, diminuait artificiellement l'acidoré- 

 sistance des Bacilles, j'ai systématiquement employé la centrifu- 

 galion (V à X gouttes de culture émulsionnees dans i5 ce. d'eau 

 et centrifugées à grande vitesse ; décantation ; nouvelle émulsion 

 dans l'eau et seconde centrifugation ; étalement du culot). De 



cette manière, j'ai pu éviter l'action modificatrice du milieu lui- 

 même sur la coloration. Il y a intérêt à ce que l'étalement soit 



(i) Voir notamment J. Conrmont et L. Pani?sct.Prec!S de microbiologie, Paris, 

 1914, p. 48o. 



(2) A. Calmette. Vlrijection bacillaire et la Tuberculose, Paris, 1920, p. 34. 



