254 H. Handovsky: Quantitative Beiträge zur Frage des Zusammenwirkens 



Ich. ließ 10 — 15 com Blut aus der Ohrvene von Kaninchen in ein Zentrifugen- 

 glas mit Glasperlen einfließen, was stets nur 1 — P/g Minuten dauerte. Das Blut 

 wurde dann 2 Minuten geschüttelt, kollert, dann je 2,5 ccm in Zentrifugengläser 

 pipettiert, mit Waschflüssigkeit auf ca. 50 ccm aufgefüllt und noch dreimal mit 

 erneuter Waschflüssigkeit je 10 Minuten lang zentrifugiert; hierauf wurde die 

 Waschflüssigkeit abermals abpipettiert, der Bl.-Brei in ein spitzes Zentrifugenglas, 

 von ca. 15 ccm Inhalt gespült und 15 Minuten scharf zentrifugiert, dann die Wasch- 

 flüssigkeit mit einer Capillarpipette möglichst vollständig abgesaugt. 



Nun wurde auf zweifache Weise weiter gearbeitet: 



Methode I: Die gewaschenen Bl. Avurden in den verschiedenen isotonischen 

 'Löswa.gsgemischen aufgeschwemmt, mit ihnen auf 100 ccm aufgefüllt und dann 

 mit 1 Volumprozent verschieden konzentrierter Saponinlösungen versetzt. 



Methode II: Die Bl. wurden in doppeltisotonischer Rz.- bzw. Salzlösung auf- 

 geschwemmt, auf 100 ccm aufgefüllt, darauf durch Mischung beider und Ver- 

 dünnung mit Wasser oder Saponinlösungen unter Vermeidung örtlicher Hämolyse 

 die gewünschten Konzentrationen hergestellt. 



Die Aufstellung einer Versuchsserie dauerte 25 — 30 Minuten, nie länger. 

 Beide Methoden ergaben, wie aus zahlreichen Kontroll versuchen hervorgeht, stets 

 die gleichen Resultate. Meist wurde zur Kontrolle mit beiden Methoden gearbeitet, 

 bei größeren Serien nur mit Methode II. Daß dabei die durch das Pipettieren 

 der Bl. -Suspensionen begangenen Fehler gering waren, erhellt aus folgender Zu- 

 sammenstellung der Versuche in Tab. I. In dieser Tabelle zeigen die Zahlen der 

 ersten Säule an, wie oft in den 53 Versuchen die in der zweiten Säule angegebene 

 Anzahl Bl. in 0,004 cmm gezählt wurden. Die Zählung war stets in derThoma- 

 Zeissschen Zählkammer in der üblichen Weise vorgenommen worden. 



Tabelle I 







In 0,004 cmm sind enthalten: 







Zahl de3 Versuche 

 1 



Erythrocyten 

 424 



2 





425 



4 





426 



1 





427 



1 





428 



8 





432 



16 





436 



3 





438 



8 





440 



1 





441 



1 





442 



3 





443 



3 





445 



1 





446 



53 



Mittel 



436 



Die Versuchsserien wurden dann in den Brutschrank von 37° gebracht, darin 

 2 Stunden belassen, nachdem sich herausgestellt hatte, daß die Hämolyse 2 mal 

 nach 4 Stunden und 2 mal nach 6 Stunden nicht weiter zugenommen hat. Hier- 

 auf wurden die Serien mindestens 10 Stunden im Eisschranli belassen und dann der 

 Hämolysegrad mittels Zählung der Bl. bestimmt, nachdem sich aus früheren Unter- 

 suchungen ergeben hatte, daß es eine partielle Hämolyse einzelner Bl. in vitro nicht 

 gibt, daß also die Bestimmung der Hämolyse durch Zählung der nicht hämoly- 

 sierten Bl. und durch colorimetrische Bestimmung des ausgetretenen Hämoglobins 



