Zur Technik der Gewebskulturen von Regenwürmern in vitro. 293 



verjüngten Gewebe entstehen weiterhin viele Organe [Zielinsha^), 

 Rumjanzew^)]. Durch Amputieren des Kopf- oder Hinterendes des 

 Wurmes bekamen wir auf diese Weise ein Material in die Hand, welches 

 seinem morphologischen Bau nach dem Embryonalmaterial nahestand. 



Bei der Wahl der Mediumzubereitungsmethode blieben wir auf dem von Kron- 

 towsky und Schustowa angewandten Medium stehen, nämlich auf der Kombination 

 von Agar mit Gewebsextrakt (Organplasma, Preßsaft der deutschen Autoren). 



Bei dieser Kombination gibt das Agar das mechanische Stroma, während der 

 Gewebeextrakt die Nährsubstanzen liefert. Um die Nährsubstanzen möglichst 

 wenig verändert zu bewahren (die im Zellprotoplasma und im Gewebesaft enthal- 

 tenen genuinen Eiweißstoffe u. a.) sterilisiert man besser mittelst Filtrieren durch 

 eine Chamberlandkerze, als durch Kochen, oder wenn man die Bouillon aus den 

 Muskeln desselben Tieres entnimmt, wie dies Lewis vorschlägt. Statt des Agars 

 kann man, um die erwünschte Dichtheit zu erlangen, gleichfalls das Blutplasma 

 eines anderen Tieres hinzusetzen, indem man empirisch ein solches aufsucht, 

 welches sich zu diesem Zweck eignet und keine citotoxische Wirkung ausübt. 

 Bei unseren Versuchen gab jedoch letztere Kombination keine positiven Resultate. 

 Bei Anwendung kün studier Medien stößt man auf ein ziemlich großes Hindernis, 

 nähmlich auf di^ Notwendigkeit einer genauen Kenntnis des osmotischen Drucks 

 des Gewebssafts, der zvir Herstellung von isosmotischem Gewebsextrakt erforder- 

 lich ist. Auf dieses Hinderrüs stießen auch wir bei der Zubereitung des Gewebs- 

 extraktes aus Würmern. In der diesbezüglichen Literatur fanden wir keine genauen 

 Angaben über die Größe des osmotischen Drucks für die Gewebe des Regenwurms^). 

 Zur Zubereitung der physiologischen Salzlösung benutzten wir Ringersche Lösung 

 mit 0,7 — 0,8% NaCl, in der Annahme, daß, wenn wir auch einen etwaigen Fehler 

 zuließen, dieser doch nur sehr gering sein könnte, da der Zusatz des Gewebssafts 

 ihn bedeutend ausgleichen müßte. 



Eine weitere nicht minder wichtige Aufgabe war das Erhalten bakterien- 

 freier Würmerstückchen. Jedoch ist es uns gelungen, auch dieses Hindernis auf 

 sehr einfache Weise zu beseitigen. Die zum Anstellen der Versuche gewählten 

 Würmer wurden im Laufe von 2 — 3 Tagen zwischen feuchtem Filtrierpapier ge- 

 halten: während dieser Zeit entleeite sich ihre Darmröhre. Vor der Operation wurde 

 der Wurm längere Zeit in fließendem Wasser abgespült, hiernach wurde seine 

 Oberfläche mit Subhmat desinfiziert, mit Jod bestrichen, und der Wurm an einem 

 dichten desinfizierten Korken befestigt. . Die Operation wurde mit sterUen Instru- 

 menten vollzogen. Das abgeschnittene Stückchen des notwendigen Gewebes 

 übertrugen wir in sterile Ringersche Lösung. In den FäUen, wo eine Regenerations- 

 knospe amputiert wurde, spülten wir den Wurm sorgfältig mit Wasser ab, wonach 

 die Oberfläche der Regenerationsknospe mit 6 proz. Jodtinktur übertüncht wurde. 

 Die entnommenen Stückchen wurden bis zur gewünschten Größe zerkleinert und 

 darauf in Petrischalen mit steriler Ringerlösung mehrfach abgespült. Wir nahmen 

 gewöhnlich 15 solcher Waschungen vor. Die ausgewaschenen Stückchen wurden 

 in einem Tropfen des Mediums auf ein Deckglas aufgetragen und mit Vaselin abge- 

 schlossen. Die auf solche Art angelegten Kulturen gaben ein nur geringes Prozent 

 von Verunreinigung. Im ganzen stellen wir fünf Serien von Versuchen mit Gewebe- 

 extrakten + Agar an und zwei Serien mit Zusatz zum Gewebeextrakt von Pferde- 



^) Zielinslca, Über Regeneratinosvorgänge bei Lumbriciden. Jen. Zeitschr. 

 44. 1909. 



^) Rumjanzew, Observation on the Regeneration of the anterior end in the 

 Lumbricidae. Rev. Zool. Russe. 1. 1917. 



^) Siehe die Monographien von Bethe, Botazzi, Führt u. a. 



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