294 A. Krontowsky und A. Rumianzew: 



resp. Hundeplasma. Die Versuche umfaßten über 90 einzelne Kulturen. Der Ge- 

 webeestrakt war seinem Gehalt nach verschieden. In dieser Arbeit werden wir 

 die Zubereitung vom Gewebeextrakt Nr. 4 anführen, des dicksten von allen ange- 

 wandten Extrakten, mit dem wir die besten Resultate erzielten. Zu einer Her- 

 stellung wurden 22,5 g des vorderen bis zum 9. — 10. Segment amputierten Kopf- 

 endes der Würmer genommen. Wir wählten die vorderen Segmente, um Sand und 

 Humus zu vermeiden, welche trotz des 1 — 2tägigen Hungerns doch noch im 

 Darmkanal zurückbleiben. Die amputierten Teile ^vurden in einer Porzellanschale 

 sorgfältig mit Glas zerrieben. Zu dieser Mischung fügten wir 22,5 ccm Ringer- 

 lösung hinzu. Der erhaltene Brei wurde gut durchmischt und blieb 1 Stunde lang 

 zum Sedimentieren stehen. Zu dieser Mischung gössen wir während des Sedimen- 

 tierens 20 ccm einer hauptsächlich aus reiner Hämolymphe des Wurmes bestehen- 

 den Mischung hinzu. Die Hämolymphe erhielten wir folgendermaßen: Die nach 

 der Amputation des Kopfendes zurückgebliebenen Würmerreste wurden in Glas- 

 schalen in kleine Stücke zerschnitten; der aus Stückchen bestehende Brei wurde 

 auf ein feines Messignetz aufgetragen, in letzteres eingehüllt und in einen konischen 

 Meßzylinder leicht eingedrückt. Nach Verlauf einiger Minuten begann durch das 

 Netz eine braunrote, dicke, klebrige, doch vollkommen sand- und fremdkörper- 

 freie Flüssigkeit durchzusickern. Die mikroskopische Analyse zeigte das Vorhan- 

 densein verschiedener Zellelemente. Im Laufe von 1 Stunde sind 20 ccm abfiltriert 

 worden. Nach Zusatz dieser 20 ccm Hämolymphe zum zerriebenen Brei wurde 

 letzterer sorgfältig durchmischt und 15 Minuten lang zentrifugiert. Die abzentri- 

 fugierte Flüssigkeit filtrierten wir durch einen Chamberlandfüter. Das endgültige 

 Fütrat ist durchsichtig und strohgelbfarben. Beim Einbetten des Stückchens ver- 

 mischten wir entweder im voraus das Agar mit dem Extrakt, oder wir trugen auf 

 das Stückchen einen Tropfen Extrakt auf und fügten alsdami das Agar hinzu. 

 Hierbei sei bemerkt, daß der Prozentgehalt des Agars im Medium nicht 0,5% über- 

 schreiten darf. 



Bei Anwendung der beschriebenen Methodik ist es uns gelungen, 

 folgendes zu kultivieren: Regenerationsgewebe von 5 — 6tägiger Dauer, 

 Gewebe der Knospe des Hinterendes unreifer Individuen, Dissepimente 

 und Blutgefäße mit chloragogenem Gewebe. Am nächsten Tage (manch- 

 mal schon nach 12 Stunden) nach der Explantation konnte man um die 

 Stückchen herum eine kleine Wachstumszone bemerken. Die mikro- 

 skopische Untersuchung ergab ein gutes Wachstum der Gewebe in den 

 aus regenerativen Knospen des Hinterendes zubereiteten Kulturen 

 (Mikroph. 1, 2); in den Kulturen, die aus Stückchen von Blutgefäßen 

 angelegt waren, konnte man eine deutliche Emigration der chlorago- 

 genen Zellen wahrnehmen (Mikroph. 3). Am 2. Tage vergrößerte sich 

 die Wachstumszone noch bedeutender, so daß sie an Breite das zum 

 Versuch genommene Stückchen übertraf. In einer der Kulturen ver- 

 kleinerte sich das Stückchen um so viel, daß es dünn und durchsichtig 

 wurde (Mikroph. 1). Beim Durchsehen aller Kulturen konnte man 

 sich leicht davon überzeugen, daß die die Wachstumszone formierenden 

 Zellen ihrer Größe und Form nach verschiedenartig sind. Bald sind 

 sie abgerundet, bald spindelförmig, bald keilförmig. Hier und da 

 anastomosieren sie miteinander. Ihrer Struktur nach gleichen die 

 ZeUen der Wachstumszone im allgemeinen dem mesenchymatösen 



