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Methodik. 



Zwecks leichten Erhaltens der Leukocyten des Blutes wurde die im hiesigen Insti- 

 tut übliche und schon oft beschriebene Methodik 1 ) befolgt, mittels welcher es in ein- 

 facher Weise gelingt, aus dem Blute des Pferdes eine Leukocytensuspension mit nur 

 wenig roten Blutkörperchen vermischt, zu bekommen. Das Blut wird zu diesem Zwecke 

 in eine Na-Citratkochsalzlösung aufgefangen, in welcher in kurzer Zeit die roten Blut- 

 körperchen sich sedimentieren und eine obere Flüssigkeit mit den Blutplättchen und 

 der Mehrzahl der weißen Blutkörperchen abgehebert werden kann. Durch wiederhol- 

 tes Zentrifugieren mit physiologischer Kochsalzlösung gelingt es, die Blutplättchen zu 

 entfernen und eine dicke Suspension in NaCl 0,9% zu bekommen, von welcher mit der 

 Pipette bestimmte Mengen den zu untersuchenden Flüssigkeiten zugesetzt werden 

 können; falls man von solchen Flüssigkeiten die Wirkung auf die Phagocytose unter- 

 suchen will, kann man nach einer gewissen Einwirkungszeit ein willkürliches Ob j ekt der 

 Phagocytose, inNaCl 0,9% suspendiert, in abgemessener Menge gleichfalls zusetzen. 



Zum leichten Erhalten von Exsudatleukocyten wurde einer Methode gefolgt, 

 wie sie, auf schon bekannten Tatsachen stützend, von mir ausgearbeitet ist 2 ), 

 und mittels welcher es gelingt, innerhalb weniger Stunden über genügende Mengen 

 dieser Zellen zu verfügen. Die Methode besteht kurz gesagt darin, daß einem er- 

 wachsenen Kaninchen etwa 200 com einer Kochsalzlösung oder einer damit über- 

 einstimmenden Lösung in die Bauchhöhle eingespritzt werden (z. B. Ringerlösung 

 oder verdünntes Blutserum); der Kochsalzlösung kann ein Zusatz von etwa 0,5% 

 Stärkekleister zugegeben werden, aber dies ist durchaus unnötig. Es können auch 

 beliebige andere Tiere verwendet werden. Etwa 3 — 5 Stunden später oder auch 

 am nächsten Tage 3 — 5 Stunden nach wiederholter Injektion kann durch Punk- 

 tion mittels Troikart mit Seitenöffnungen ein Teil der injizierten Flüssigkeit, 

 mit Leukocyten vermischt, in leichter Weise ausgehebert werden und in eine 

 Citratkochsalzlösung aufgefangen, damit keine Gerinnung entstehe. Die Menge 

 der so erhaltenen Leukocyten, durch Zentrifugieren in kalibrierten Röhrchen ge- 

 messen, variiert von 0,1 — 0,3 cem nach einmaliger und von 0,5 bis mehrere cem 

 nach wiederholter Injektion. Wenn ein Kaninchen schon ein oder mehrere Male 

 verwendet Worden ist, geht der Zufluß von Leukocyten viel schneller vonstatten. 

 Die emigrierten Zellen bestehen zu 90 — 95% aus polynucleären Leukocyten. 



Auch diese Suspension wird in ähnlicher Weise, wie oben für die Blutleuko- 

 cyten beschrieben wurde, mit Kochsalzlösung ausgewaschen und die Leukocyten 

 wiederum den verschiedenen Lösungen zugesetzt. 



Bei den hier beschriebenen Versuchen blieben nun die Leukocyten, sei es von 

 Blut, sei es von Exsudaten, während verschieden langer Zeit bei einer Temperatur 

 von 37° oder auch von 0° dem Einfluß eines bestimmten Milieus ausgesetzt. An 

 bestimmten Zeitintervallen wurden dann den verschiedenen Lösungen eine be- 

 stimmte Menge Leukocyten entnommen, mit NaCl 0,9% in der Zentrifuge aus- 

 gewaschen und je ein gleiches Quantum in dicker Suspension zugesetzt zu 3 cem 

 einer Mischung von 5 Teilen NaCl 0,9% und 1 Teil Serum derselben Tierart. Wie 

 ich früher hatte feststellen können, bildet diese Flüssigkeit eine Art Standard- 

 milieu, in welchem normale Leukocyten Amylum oiyzae ausnahmslos maximal 

 zu phagocytieren imstande sind. Dann und wann wurde daneben auch ein anderes 

 Milieu der Phagocytose verwendet. Es wurde eine bestimmte Menge Amylum 



a ) Siehe u. m. H. J. Hamburger, Die Technik des Arbeitens mit Phagocyten 

 zu biologischen Zwecken. Abderhaldens Handbuch der biochemischen Arbeits- 

 methoden. Bd. IX. 



2 ) J. de Haan, Doktordiss. Groningen 1920; auch Arch. neerland. de physiol. 

 %, 674. 1918. Die Methode wird ausführlich erwähnt werden in einem Artikel 

 Hamburgers für Abderhaldens Handbuch der biologischen Arbeitsmethoden. 



