SÉANCE DU 26 AVRIL 899 



La solution éthérée, centrifugée, décantée et évaporée, laisse un résidu que 

 Ton pèse à titre de renseignement ; il renferme, à l'état brut, la totalité des 

 graisses neutres, des acides gras préexistants, des lipoïdes phosphores et de 

 la cholestérine libre ou combinée. 



Dosage de la cholestérine libre. — Soit gr., 20 le poids d'extrait ainsi obtenu. 

 On le dissout à chaud dans 50 fois son poids d'alcool ahsolu (10 ce). 



Le liquide porté à l'ébullition est additionné d'une solution bouillante de 

 digitonine àl p.lOOdans l'alcool absolu. Pour la plupart des sérums humains, 

 il suffit de mettre un poids de digitonine égal à la moitié de celui de l'extrait ; 

 pour le sérum des ictériques, il peut être nécessaire d'augmenter sensi- 

 blement cette quantité. (Nous nous sommes assurés qu'un excès de digito- 

 nine ne faussait pas les résultats.) Dans l'exemple que nous avons choisi, 

 nous ajouterons donc 10 ce. de solution de digitonine à 1 p. 100. En tenant 

 compte de l'évaporation, le volume total est d'environ 18 ce Pour déter- 

 miner la précipitation du complexe, il faut faire tomber le titre alcoolique du 

 mélange à 95 degrés en ajoutant de l'eau distillée. 



Dans notre cas, nous verserons donc 1 ce 5 d'eau distillée. Le complexe 

 se précipite aussitôt. On le laisse déposer pendant une heure, et on sépare le 

 précipité par centrifugation dans un tube taré ; on le lave à l'alcool à 95 degrés 

 et à l'éther, on le sèche et on le pèse. On obtient la quantité de cholestérine 

 libre en multipliant par le facteur 0,2431 le poids du complexe obtenu. 



Les solutions alcooliques réunies sont concentrées à un faible volume et 

 versées après refroidissement dans un grand excès d'éther sulfurique, auquel 

 on ajoute l'éther de lavage du complexe. La digitonine insoluble se précipite, 

 les graisses et les lipoïdes restent en solution. (L'apparition de ce précipité 

 prouve que la quantité de digitonine employée était suffisante pour fixer toute 

 la cholestérine libre.) On sépare la digitonine par centrifugation et on la lave 

 à l'éther. Les solutions éthérées réunies sont distillées et le résidu repris par 

 l'alcool est saponifié. 



Saponification. — La solution est chauffée ensuite pendant trois heures au 

 bain-marie dans un ballon muni d'un réfrigérant ascendant avec de la potasse 

 alcoolique 2,5 (25 ce de potasse par gr.20 d'extrait). L'alcool étant chassé, 

 on reprend le résidu par de l'eau chaude et, après avoir mis les acides gras en 

 liberté par addition d'acide azotique dilué, on épuise le tout à deux reprises 

 par l'éther. La couche aqueuse (A) est soutirée et mise à part pour y doser le 

 phosphore provenant de la décomposition des lipoïdes phosphores et la 

 solution éthérée lavée avec de l'eau distillée est évaporée. Le nouvel extrait 

 maintenu à l'étuve à 50 degrés pendant une heure est repris par l'éther 

 anhydre ; la solution éthérée, centrifugée et décantée, est évaporée. 



Le résidu est séché à l'étuve à 50 degrés pendant quatre à cinq heures ; on 

 le reprend par de l'éther de pétrole, qui laisse après évaporation et dessic- 

 cation à 50 degrés un mélange d'acides gras et de cholestérine, dont on déter- 

 mine le poids (B). 



Dosage de la cholestérine libérée. — La séparation de la cholestérine peut être 

 obtenue par la méthode de Kùmagawa (Biochemische Zeitschrift, t. VIII, 

 p. 212, 1908) ; mais il nous a semblé préférable de suivre pour la cholestérine 

 libérée, la méthode de Windaus, suivant le procédé que nous avons indiqué, 



