.(13) séance du 10 janvier 221 



Procédé pour la culture 

 a l'état de pureté d'un élément unique, 



par J. Oerskov. 



Le procédé, dont je vais donner la description, est basé sur le 

 fait qui a servi de fondement au procédé récemment indiqué par 

 Hort, à savoir qu'avec un système de lentilles à fort grossissement , 

 sans immersion, sans coloration ni sans aucune autre mise en re- 

 lief par effet de contraste, on distingue aisément les microbes à 

 la surface d'un milieu solide transparent. 



Avec une culture jeune, soit un bouillon âgé de 12 heures, dont 

 on désire obtenir une culture pure provenant d'un germe unique, 

 on ensemence, à l'aide d'une baguette coudée, la surface de la gé- 

 lose contenue dans une boîte de Pétri. La gélose, coulée récem- 

 ment, doit avoir des surfaces supérieure et inférieure parallèles. 

 A la surface inférieure d'un porte-objet, on trace, au diamant, 

 un réseau de traits ténus, en ayant soin que ceux-ci aient des bords 

 aussi nets que possible. La lame est stérilisée ensuite par flambage. 

 A l'aide d'un couteau flambé et refroidi, on détache un petit carré 

 de la gélose ensemencée, qu'on enlève sur le couteau, glissé par- 

 dessous, et dépose ensuite sur le porte-objet, dans la région des 

 traits. Il est préférable de tracer le réticule quadrillé à la surface 

 inférieure de la lame. On place la lame, avec le carré de gélose, sur 

 la platine du microscope où les déplacements s'opèrent dans tous 

 les sens à l'aide du chariot. La mise au point se fait pour les mi- 

 crobes avec une forte lentille, sans immersion. Pour bien les met- 

 tre en évidence, il est pratique de se servir d'une source lumineuse 

 à radiation intense, homogène et très atténuée. Il s'agit mainte- 

 nant de trouver une partie de la préparation où il ne se présente 

 qu'un seul microbe dans le champ visuel. Ceci fait, on en repère 

 la situation d'après les échelles du chariot, puis on utilise un ocu- 

 laire à micromètre et à réticule. Ensuite, on met au point, avec 

 un faible grossissement, sur le réseau du porte-objet, et, sur du 

 papier quadrillé, on trace au crayon une image des intersections 

 des rayures du porte-objet avec les carrés du micromètre. Le por- 

 te-objet, avec la gélose, est déposé sur un papier filtre, légèrement 

 humecté, dans une boîte de Pétri qu'on met à l'étuve. La forma- 

 tion de la colonie microbienne est vérifiée à des intervalles con- 

 venables. En ayant soin, avant chaque examen, de refroidir la 

 gélose à la température du microscope, on retrouve aisément le 

 point marqué par le repérage indiqué ci-dessus. De cette façon, 

 on est à même de suivre d'heure en heure la croissance de la co- 

 lonie jusqu'à ce qu'elle ait atteint des dimensions qui en permet- 

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