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Isolement des levures en milieux acide 

 par Maurice Piettre et Germano de Souza. 



En bactériologie, la séparation des levures d'avec les Bactéries 

 repose sur la méthode classique des dilutions. On sait combien de 

 matériel et de temps elle exige le plus souvent. 



Continuant nos recherches sur la biologie du sol, nous avons 

 mis au point une technique de séparation des levures basée sur 

 la réalisation de deux conditions principales dans la préparation 

 des milieux de culture : i° réaction acide gênant ou même empê- 

 chant totalement le développement des Bactéries ; 2° présence de 

 substances nutritives éminemment favorables à l'évolution, des 

 levures (saccharose, comme tout le monde sait, à 10 p. ioo). L'a- 

 cidité est obtenue comme il a été dit dans la note précédente, mais 

 en augmentant sensiblement la teneur des milieux de culture en 

 acide citrique : 12 à i5 p. 1.000. Des essais tout récents font même 

 penser qu'on peut dépasser assez largement ce pourcentage. On 

 part d'un bouillon à l'extrait de viande, peptonisé, sucré (10 p. 100 

 saccharose), neutre à la phtaléine. La teneur en matières azotées 

 est suffisante. On peut lui ajouter avec avantage o,5 p. 100 de gly- 

 cérophosphate de chaux. L'addition d'acide citrique a lieu au mo- 

 ment de l'emploi. Pour les milieux solides, elle est faite comme 

 antérieurement. 



La recherche et l'isolement des levures a été étudiée plus parti- 

 culièrement dans le sol et dans des fragments de végétaux* ou de 

 fruits. 



I. Le cas du sol est le plus délicat à cause de la rareté habituelle 

 des levures, et en raison de l'abondance des Bactéries et des Cham- 

 pignons. 5 à 10 gr. de terre recueillis suivant les règles sont ver- 

 sés dans une boîte de Pétri, arrosés de 10 à 20 gr. de bouillon à 

 i5 p. 1.000 d'acide citrique. On couvre et abandonne à 27-28 , 

 température moyenne du laboratoire. Le milieu reste toujours lim- 

 pide ; au bout de 48 heures on voit parfois apparaître de petits flo- 

 cons duveteux, mais qui ont peu tendance à se développer : en 

 même temps, s'il y a des levures, leur activité se manifeste par le 

 dégagement d'une odeur plus ou moins forte d'alcool et l'appa- 

 rition de petites bulles d'acide carbonique qui viennent crever 

 en surface. Dès lors, la fermentation alcoolique s'établit progres- 

 sivement ; à ce moment, sur les bords de la boîte de Pétri et à la 

 surface du bouillon vient se former un très mince voile plus ou 

 moins régulier ou discontinu, constitué par des cellules de levure 

 entraînées par le dégagement des bulles de CO 2 . 



Ainsi donc le produit gazeux de la fermentation met, de lui- 

 même, en évidence, l'agent causal. Il suffit de prendre des traces 



