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tenu par l'agglutination ne se laissait pas toujours démontrer par 

 la fixation du complément. D'autre part, avec des microbes ainsi 

 lavés, la fixation du complément après absorption montrait, dans 

 toutes les expériences, une séparation très distincte de types, sé- 

 paration qui correspondait toujours à une agglutination instituée 

 simultanément avec les mêmes sérums et les mêmes cultures. 

 Jusqu'à présent nous avons essayé cette méthode avec deux sé- 

 rums univalents, préparés respectivement avec des - Pneumo- 

 coques des types 1 et II, et sur 55 souches de Pneumocoques (12 

 du type I, 11 du type II, 6 du type III et 26 du type IV). 



Les sérums ont été obtenus par des injections intraveineuses 

 réitérées faites sur des Lapins avec des Pneumocoques virulents, 

 tués par une demi-heure de chauffage à 56°. Avant les expériences, 

 le sérum est inactivé par un chauffage identique (56° pendant 

 une demi-heure). Comme antigène on s'est servi de Pneumo- 

 coques cultivés pendant environ 18 heures en bouillon-ascite. On 

 centrifuge les microbes, on émulsionne le résidu dans.de l'eau 

 additionnée de 0,9 p. ïoo de sel, on chauffe jusqu'à 65° C. pen- 

 dant une demi-heure ; on centrifuge, on émulsionne de nouveau 

 le résidu dans de l'eau salée et on centrifuge. Après ce lavage ré- 

 pété, les Pneumocoques sont émulsionnés dans une petite quan- 

 tité d'eau salée, de manière à produire une suspension très épaisse 

 dont on se sert pour l'absorption. Voici comment on procède : 

 0,1 ce. de sérum est ajouté à 0,9 ce. d'émulsion de Pneumo- 

 coques et abandonné, pendant une heure, à 37 . Puis on centri- 

 fuge énergiquement, on verse immédiatement et avec précaution 

 le liquide dans d'autres tubes, et l'on s'en sert pour* la fixation 

 du complément, avec une émulsion assez claire de Pneumocoques 

 du même type que le sérum employé pour l'absorption, mais du 

 reste traitée de la même manière que l'émulsion plus épaisse. 



Le procédé suivi pour la fixation même du complément corres- 

 pond à peu près à celui employé par l'Institut pour la réaction de 

 Wassermann, le système hémolytique étant également le même. 

 Le titrage se fait en variant les doses de sérum, tandis que la 

 quantité de complément titré d'avance est maintenue constante, 

 savoir 1 1/2 x dose-étalon pour les tubes remplis d'antigène et 

 1 x dose-étalon pour les épreuves de contrôle de sérum. Par 

 dose-étalon, on entend ici la quantité minima de complément qui 

 dans les conditions données suffit pour produire une hémolyse 

 complète. Après mélange de sérum, d'antigène et de complé- 

 ment, on agite les tubes, on les laisse 3/4 d'heure à la température 

 du laboratoire et 3/4 d'heure à 37 ; après quoi on ajoute du sang 

 et de l'ambocepteur. Ensuite, on laisse 2 heures à 37 , et, éven- 

 tuellement, quelques heures à la glacière avant l'inspection. 



La méthode esquissée ci-dessus est beaucoup plus compliquée 



