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au moyen de ]a spatule de platine, une portion de la cullure à étudier. 

 Dans ces conditions, les spores so produiront dans un temps variable 

 avec la température et re^spèce de levure, mais qui est généralement de 

 deux ou trois jours. 



Fixation. — On fait des frottis avec les levures prélevées sur le bloc 

 de plâtre ou directement in situ si l'on suppose que les levures aient pu 

 sporuler dans ces conditions. Le frottis est fixé soit par la chaleur, soit 

 par quelques gouttes d'alcool ou d'une solution de formol. Si l'on désire 

 avoir un matériel assez abondant pour faire de nombreuses prépara- 

 tions, après l'avoir soumis à l'action de solvants ou de réactifs divers 

 dans le but d'étudier leur action sur l'acido-résistance, on étalera des 

 parcelles de culture à la surface de petites lames de carotte ramollies 

 par stérilisation à l'autoclave. Ces petites lames seront facilement 

 transportées, avec la culture y adhérente, d'un milieu dans un autre et 

 serviront finalement à faire le prélèvement et le frottis; elles pourront 

 servir aussi bien à faire des inclusions dans la paraffine et des coupes au 

 microtome. ^ 



Coloration par la méthode de Ziehl-Neelsen. — Rappelons en quelques 

 mots cette méthode : le frottis fixé reçoit quelques gouttes de fuchsine 

 de Ziehl; on chauffe dans la flamme d'un bec Bunsen par deux ou trois 

 fois jusqu'à émission de vapeurs; on décolore par quelques gouttes 

 d'acide azotique au 1/3; on lave à grande eau (à ce moment les spores 

 sont d'un beau rouge rubis et les cellules végétatives d'un rouge beau- 

 coup plus pâle); on recolore par une couleur bleue d'aniline telle que la 

 thionine ou le bleu polychrome, on lave à l'eau. Seules les cellules végé- 

 tatives sont colorées en bleu tandis que les spores ont conservé leur 

 belle teinte rouge, grâce à laquelle elles se distinguent immédiatement, 

 donnant des préparations très remarquables. 



L'acido-résistance de ces spores étant beaucoup plus marquée que 

 celle du B. de Koch, on peut modifier dans une large mesure la méthode 

 Ziehl-Neelsen. C'est ainsi qu'il n'est point nécessaire de soumettre la 

 fuchsine à l'action de la chaleur; l'acide peut être beaucoup moins dilué, 

 il peut être remplacé par l'acide sulfurique. L'acido-résistance se mani- 

 feste encore après l'action (très rapide) des acides azotique et sulfurique 

 purs et froids ; à chaud, il va sans dire qu'il ne subsiste rien de la pré- 

 paration. 



En colorant par le violet de gentiane phéniqué, décolorant par l'acide 

 azotique au 1/3 et recolorant par la fuchsine de Ziehl au 1/10, on 

 obtient les spores en bleu, tranchant sur le fond rose des cellules 

 végétatives. 



En appliquant la méthode de Biot, c'est-â-dire le Ziehl-Neelsen, y 

 compris la décoloration par l'acide, lavage et action du formol pendant 

 quelques minutes, on obtient les spores d'un beau rouge, sur fond 

 incolore. 



