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D'autres procédés sont utilisables : tel celui qui consiste à couvrir la lame 

 de liquide, puis à la redresser et à récupérer, à la pipette appliquée sur un 

 des angles inférieurs, effilure en l'air, l'excès de suspension microbienne; tel 

 cet autre qui utilise des lames posées horizontalement, sur lesquelles on 

 laisse tomber plusieurs gouttes séparées, dont on réaspire ensuite le maxi- 

 mum de liquide avec une pipette très effilée. 



Fixation des microbes. — Il est tou-t à fait inutile, et même nuisible, de fixer 

 les microbes en suspension avant de les étaler : les cils restent adhérents aux 

 bacilles sans cela, et l'addition d'un fixateur provoque souvent des agglutina- 

 tions défavorables. 



La fixation des microbes, après étalement, par l'alcool, peut être remplacée 

 par celle à la flamme (deux brefs passages sur flamme du Bunsen). Ni l'une, 

 ni l'autre, ne sont indispensables, car le réactif colorant complet, versé très 

 chaud sur la préparation, agit lui-même comme fixateur. 



Mordant. — Il est nécessaire, pour obtenir des cils colorés, d'associer le 

 tanin et l'alun; chacun d'eux, sans l'autre, ne donne rien. Nous utilisons, 

 indifféremment, le tanin à l'alcool ou le tanin à l'éther. L'addition au 

 mordant de divers produits, tels que : sulfate de zinc, aniline, alun de fer, 

 orcéine, etc.. (qu'on trouve dans certaines formules pour la coloration des 

 cils), n'offre aucun avantage. Une action préalable du mordant seul, avant 

 emploi du réactif complet (mordant -j- colorant), n'améliore pas les cils et 

 augmente les précipités de fond. 



Réactif colorant complet. — L'expérience nous a montré que, pour colorer 

 intensément et à coup sûr les cils, le réactif complet doit agir brusquement 

 à une température élevée (ce qui était facile à réaliser) et, de plus, doit pré- 

 cipiter très vite, en quelques secondes, après avoir été versé sur la lame, 

 mais pas avant. Or, on retarde cette précipitation en augmentant la teneur 

 du réactif en tanin ou en alcool, tandis qu'on l'accélère en augmentant la 

 proportion de l'alun ou de la matière colorante. Il nous a donc fallu associer 

 ces éléments d'actions contraires, de manière à obtenir la précipitation dans 

 le temps voulu. Après de nombreux essais, nous avons arrêté la composition 

 du mordant (1 partie de solution de tanin pour 2 parties de solution d'alun) 

 et fixé la proportion convenable d'alcool (1 partie d'alcool pour 10 de mor- 

 dant). Ces constantes acquises, il suffit, désormais, de déterminer, vis-à-vis 

 d'elles, la quantité favorable de matière colorante, seul élément variable de 

 la formule. Eraploie-t-on une quantité insuffisante de colorant? La précipi- 

 tation est lente à se produire; les cils ne se colorent pas ou se colorent mal 

 (cils ponctués, cils trop pâles). La proportion du colorant est-elle trop forte? 

 La précipitation est immédiate, dès mélange du colorant au mordant ; les cils 

 peuvent être colorés, mais les bons résultats sont irréguliers el d'abondants 

 précipités, adhérents à la lame, déparent les préparations. La dose optiraa 

 de colorant précipite quelques secondes après dépôt sur la lame, et les pré- 

 parations possèdent alors le maximum de netteté et de propreté. 



Préparer à l'avance un réactif complet, en mélangeant à froid mordant et 

 colorant, comme le fait Pietfield (avec le violet de gentiane), est une tech- 

 nique défectueuse, car il se produit beaucoup de précipités, à moins qu'on 

 exagère la richesse en tanin ou en alcool du mélange. De toutes façons, on a 

 des préparations sales, irrégulières, ou trop faibles. 



