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mit Wasser unter Zusatz von Chloroform 20 bis 40 Stunden * 

 bei Zimmertemperatur extrahiert. 



Zu Versuchszwecken wurden der Organbrei, der filtrierte 

 wässerige Extrakt und die aus dem letzteren isolierte enzym- 

 haltige Substanz benützt. Zur Isolierung des Enzyms wurde 

 der filtrierte Auszug mit Alkohol gefällt, der Niederschlag rasch 

 an der Saugpumpe filtriert, mit Alkohol gewaschen und bei 

 30° C. im Trockenschrank oder bei gewöhnlicher Temperatur 

 im Vakuumexsikkator über Schwefelsäure getrocknet. 



Die Einwirkungsdauer des Extraktes, beziehungsweise des 

 Enzyms auf Äskulin betrug 24 Stunden bis 10 Tage bei 30° C. 

 Um die Mitwirkung von Mikroorganismen auszuschließen, 

 wurden sämtliche Versuche unter reichlichem Zusatz von 

 Toluol, meist aber von Chloroform ausgeführt; bei längerer 

 Versuchsdauer wurden die Antiseptika erneuert. Die Abwesen- 

 heit von Bakterien konnte auch mikroskopisch festgestellt 

 werden. 



Jeder Versuch war von einem Kontrollversuch begleitet, 

 indem nicht nur der normale, aktive Organextrakt, beziehungs- 

 weise das daraus isolierte aktive Enzym auf Äskulin einwirkte, 

 sondern gleichzeitig und unter den vollkommen gleichen 

 Versuchsbedingungen der gekochte Extrakt, respektive die 

 gekochte Enzymlösung auf Äskulin wirksam war. Dabei konnte, 

 falls eine Spaltung des Äskulins eintrat, diese nur bei dem 

 aktiven Extrakt oder Enzym, nicht aber bei dem Kontroll- 

 versuch beobachtet werden, wodurch die Enzymnatur der 

 erfolgten Äskulinspaltung sichergestellt war. 



Die Untersuchung der Spaltungsprodukte des Äskulins, 

 des Äskuletins und der Glukose geschah auf folgende Weise: 

 Nach Ablauf der Versuchsdauer wurde der Inhalt des Versuchs- 

 gefäßes kalt filtriert, der Rückstand auf dem Filter mit heißem 

 Alkohol behandelt und die Lösung auf Askuletin geprüft. 



Zur Erkennung desÄskuletins dienten folgende Reaktionen: 

 die Grünfärbung mit Eisenchlorid, auf Zusatz von Ammoniak 

 rot; die Gelbfärbung mit Kali- oder Natronlauge; die gelbe 



1 Je nach der Beschaffenheit des Materials in frisch gepflücktem Zustande 

 kürzere, in lufttrockenem Zustande längere Zeit. 



