GM 



Roh: 



z. N-Lös. 



H 2 





0-40 : 





24 cm 3 



+ 36 



cm 3 = 60 cm 3 



0-50 : 





20 



+ 20 



= 40 



0-60 : 





24 



+ 16 



= 40 



Plasmolytisch-volumetrische Methode. 121 



GM Rohrz. N-Lös. H 2 



0'20 : 10 cm 3 +40 an 3 = 50cm 3 



0-25 : 17-5 +52-5 = 70 



0-30 : 21 +49 = 70 



0-35 : 21 +39 =60 



Ich brachte in die mit Fettstift bezeichneten Pulvergläschen zuerst mit Vollpipetten alle durch die Zehnerstellen angegebenen 

 Mengen H 2 (also je 10, 20, 30... cm 3 ), sodann mit der Meßröhre die den Eincrstellen entsprechende Anzahl Kubikzenti 

 meter; hierauf mit getrockneten Instrumenten entsprechend die Zehner und Einer cm 3 N-Lösung. Die Fläschchen wurden möglichst 

 kurz geöffnet. 



Dadurch, daß jedes Volum in zwei Portionen gemessen wurde, scheint der Messungsfehler vergrößert zu werden. Tat- 

 sachlich war indes bei sorgfältigem Arbeiten jeder Ablesungsfehler bei den dünnen Röhren wohl weit kleiner als die Hälfte von 

 dem Fehler, der entstanden wäre bei Verwendung von Titrierbüretten solcher Dimensionen, daß die gewünschten Volumina auf 

 einmal hätten gemessen werden können. Vollpipetten und Meßröhren sind ferner bequemer zu handhaben und ■ — dies ist der 

 Hauptgrund, warum ich ihnen den Vorzug gebe — viel sicherer und leichter rein von Hefe und Schimmelpilzen zu erhalten. 



1 

 Der Ablesungsfehler betrug im ganzen kaum mehr als — cm 3 . Das entspricht im ungünstigen Fall z. B. bei Herstellung 



40 



von 50 cm 3 - 50 GM aus N-Lösung einem Verdünnungsfehler = + - 0005 GM, bei Bereitung von 70 cm 3 - 30 GM 



einem Fehler = + 0"00036 GM. Dieser Fehler ist nur für die Beurteilung der genauesten plasmolytisch-volumetrischer. Resultate 



nicht ganz zu vernachlässigen. Der wahrscheinliche Fehler ist weit kleiner. 



Die Konzentrationsdifferenz benachbarter Lösungen betrug meist - 05 GM Rohrz. Wo ich Lösungen von nur 

 - 01 GM Abstand brauchte, wie beispielsweise im Versuch 18 und 19 solche von - 26, - 27, 0*28 GM, da stellte ich sie mir 

 durch volumetrische Mischung aus 0"25 und 0-30 GM her; z. B. 0"28 GM aus 8 cm 3 0-25 GM + 12 c;«' 0*30 GM. 



Schlierenbildung kann bei Rohrzucker-Plasmolysen, wir ich durch mehrfache unangenehme Vorkommnisse erfuhr, eine 

 bedeutende Fehlerquelle werden, besonders wenn frisch bereitete Lösungen im unteren Teil des Fläschchens noch etwas 

 konzentrierter als oben sind. Versuch 7 gibt ein Beispiel. Ich schüttelte die verdünnten Lösungen gut durch und ließ sie dann 

 noch womöglich vor dem Eintragen der Präparate 1 j 2 bis 1 Stunde stehen. 



Herstellung und .Behandlung der Präparate: Alle Präparate schnitt ich aus freier Hand, eventuell zwischen 

 Hollundermark, nie mit dem Mikrotom. Eine der wichtigsten Regeln für alles plasmolytische Arbeiten ist, daß die Schnitte 

 nicht zu dünn sein dürfen. Die Zellen, iu denen der Grad der Plasmolyse beurteilt werden soll, müssen stets durch 

 mindestens eine Lage unverletzter Zellen von der Schnittfläche getrennt sein. In der Randlage treten ver- 

 schiedene Abnormalitäten auf. Allgemeine Regeln über die Dicke der Schnitte lassen sich schwer aufstellen; für jedes Objekt muß 

 die Erfahrung des Beobachters entscheiden. In den inneren Zellagen dickerer Schnitte tritt nur die Plasmolyse naturgemäß später 

 ein. Wenn Grenzplasmolyse an dickeren Grundgewebsschnitten oft sehr schwer zu erkennen ist, so entfällt diese Schwierigkeit 

 für die plasmolytisch-volumetrische Methode; die Konturen stark und endgültig plasmolysierter Protoplaste lassen sich, bei ent 

 sprechender Übung und Aufmerksamkeit, selbst in hyalinen Zellen im Innern dickerer Schnitte stets deutlich wahrnehmen 

 Eventuell hilft starkes Variieren in der Öffnungsweite der Irisblende. Ob die Schnitte direkt nach dem Schneiden in die Plasmo- 

 lytika gebracht werden oder erst in H 2 liegen sollen, darüber läßt sich keine allgemeine Regel aufstellen. - Wir werden uns mit 

 der Frage noch beschäftigen; ebenso mit der nach der Dauer der Plasmolyse. 



Zum Eintragen der Präparate in die Lösungen und zum Herausnehmen verwendete ich eine lange, glatte, sehr leicht 

 federnde Nickelpinzette. 



Besondere Aufmerksamkeit ist darauf zu verwenden, daß während der mikroskopischen Untersuchung der Lösung-S 

 tropfen, in dem das Präparat liegt, nicht konzentrierter wird. In dieser Beziehung ist die plasmolytisch-volumetrische Methode 

 ungünstiger daran als die grenzplasmolytische, da die Beobachtung und Messung eines Präparates viel länger, oft bis 15 Minuten, 

 dauern kann. 



Die Pipette, mit der der Tropfen auf den Objektträger gebracht wird, wurde stets erst nochmals mit der betreffenden 

 Lösung ausgespritzt. Während der Beobachtung wurde alle paar Minuten Lösung durchgesaugt. Ich verwendete nicht Lösch 

 papier, sondern brachte einen großen Tropfen Lösung mit der Pipette vorsichtig an die eine Seite des Präparates, so daß das 

 Deckglas schwamm, und saugte unmittelbar darauf von der andern Seite her ab. Das geht viel rascher. Verdunstung wird ver- 

 mieden. Die Protoplastenvolumina reagieren unglaublich fein auf Konzentrierung der Lösung. Zur Kontrolle wurde deshalb bei 

 langer dauernden Messungen stets zuletzt revidiert, ob in den zuerst gemessenen Zellen die Protoplastenläng« die gleiche 

 gehlieben sei. 



Die Proportionalitätsversuche lassen sich, wie schon erwähnt, nach zwei Hauptarten ausführen: 



