Kez, inleitung. 187 
- Immnserum zunächst nur in ganz geringer Menge zur Verfügung steht. 
Der Eiweiss-Auszug des zur Immunisation verwendeten Samens (verg oben, p 
E 183) muss, wenn der Titer gestellt werden soll, im Gegensatz zu dem zur Immuni 
sation venützten der auch etwas trübe sein darf, spiegelblank sein Genigt zur 
—  EFrreichng dieser Eigenschaft einmalige Filtration nicht, so muss sie bis zum 
Erfolg wiederholt werden. - Hierbei zeigt sich die Wichtigkeit der vorherigen 
— Entfernung von Olen aus dem zu extrahierenden Samenpulver (vergl oben, p. 182). 
E Man stellt in einen hinten mit verschiebbaren schwarzen Zeugstreigen, durch 
die das Licht abgeblendet werden kann, verschenen Reagenzglas-Ständer 10 seht 
diinne Reagenzglaser und beschickt diesleben in der Weise, dass man immer aus 
dem vorhergehenden i ccm der dort vorhandenen Mischung wieder mit lccm steriler 
physiologischer Kochsalzlösung verdünnt und zuverlässig umschüttelt, die aufei- 
nander folgenden 7 Gläschen mit den Verdünnungen 1.200, 1:400, 1: 800, 1:1600, 
1:3200 bis 1:51200. - Die drei letzten Gläschen werden behufs "Kontrolle beschickt 
mit: 1 ccm Eiweiss-Lösung des Antigens ohne jede Beimischung, 1 ccm physiologi- 
sche Kochsalzlösung mit 0,1 ccm Immunserum; 1 ccm Eiweiss-Lösung des Antigens 
in Verdünnung 1:1000 mit 0,1 ccm Normal-Kaninchenserum. 
Das Normal-Kaninchenserum hat bei uns der sonst zu Versuchen nicht verwendete 
Zuchtbock zu liefern; es wird aus der Ohrvene in der oben beschriebenen Weise 
gewonnen und ist zu jedem Versuch immer neu herzustellen 
Halt man die oben für Füllung der Gläschen 1 - 7 angegebene Reihenfolge ge- 
nau inne, so kann man die gleiche Pipette benützen. Schulung im Abmessen von 
kleinen Flüssigkeitsmengen, wie sie z.B. bei dem chemischen Massanalyse gelernt 
wird, ist zu gutem Erfolg erforderlich. 
“Die Gläschen bleiben offen, höchstens wird ein Stück rienen Papiers über sie 
oet. Die früher angewendete Verschliessung mit Wattepfropfen haben wir aufge- 
geben, weil dadurch leicht flöckchen in die Proben geraten, welche zu Täuschen 
gen Veranlassung geben kónner. 
l Früher habən wir sogleich nach Zusammengabe der Flüssigkeiten dieselben 
stets sofort innig gemischt; wir warten samit jetzt etwa 72 Stunde, un eventuell 
auftretende "Unlenhuth'sche" Ringe zu beobachten (15). 
3 Bei der Ausführung dieses Verfahrens, welches auf einer Niederachlage-Biléung 
an der Grenze der übsreinander geschichteten Flüssigkeiten beruht, hat man vor- 
sichtig darauf zu achten, dass des Serum zu den Extrakten an den Wandungen der 
. Reagenzgläser herabläuft und nicht direkt in die Flüssigkeit getropft wird Da 
ES das Serum spezifisch schwerer ist, sinkt es nach unten ety nun Fiweiss-Ver- 
| wendtscheft vor, so tritt an der Berührungsstelle zwischen Serw: und Extrakt ein 
|. 8&eutlciher weisser Ring auf, der sich nach einiger Zeit in eine Wolke verwan- 
delt Das Eintreten dieses Phaenomens ist stets hoch willkommen, weil es in den 
Beisten Fällen das sichere Gelingen der Immnisation ankürdigt Doch treten die 
. “UHLENHUTH'schen Ringe" bei unsern Objekten, die im 5 einen niedrigen 
| Biweibe-Gehalt haben, höchstens bis zu einer Verdünnung 1 O auf; meist kann 
man mur in den Verdünnungsgläschen 1: 200 und 1:400 damit Steg 
T eh einer halben Stunde werden alle Reagenzgläser(also auch die mit den 
— UHLEN 'schen Ringen) gut durch Schüttel gemischt und in einen Brutschrakk von 
. e konstanter Temperatur untergebracht. Nach 12 Stunden wird der Verlauf 
der Resktion festgestellt. Nach dieser Zeit hat sich der Niederschlag, soweit er 
vorhanden ist, zu Boden gesetzt Durch kurzes Aufschütteln wird er aufgerünrt 
und muss sich dann (meist durch Schl ieren-ildung) unzweifelhaft von der im Ubri- 
gen klaren Flüssigkeit abheben 
die letzte unzweifelhafte Bildung sin 'Niederschlags (nicht! einer Prübung) 
bezeichnet den Titer des Serums: 1:51200 heisst, dass in dem Cláschen mit Ver- 
det hatte. 
Dabei ist u Wertung des genzen Versucas wnorlässlicho Vorbedingung, dass 
ie cei Had 8 sét: vollkormen klar geblieben sind Ist in einem dreselben such  — E 
Tur eine schwache Triibung e entstanden. de braucht in diesem Fell kein — eee 
|, 1:51200 des geprüften. Eiwei ss-Auszugs sich noch der Niederschlag Bebil- d 
