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que j'ai indiquée antérieurement, meurent au bout de 8 à 10 générations. 
Mais, tant qu’elles sont fécondes, elles donnent naissance à des cultures 
charbonneuses riches en belles spores dont l’atténuation est plus ou moins 
grande. 
La privation d'oxygène a donc pour résultat, en ce qui concerne la 
propriété sporogène, de contrebalancer l’action de la chaleur et de conser- 
ver au protoplasma ses propriétés reproductrices. Dans ces conditions, on 
pouvait avec raison se demander si l'emploi du vide imparfait ne favorise- 
rait pas le retour de la sporulation, chez la Bactéridie rendue asporogène par 
l’action combinée de la chaleur et de Pair. 
J'ai donc, tout d’abord, essayé ce moyen. 
» Expérience. — Une culture charbonneuse, restée asporogène après deux passages 
par la souris, est réensemencée le 7 avril 1892 dans un tube à vide, d’où l'on extrait 
rapidement l'air à l’aide de la pompe à mercure. Au bout de quatre jours de séjour 
dans l’étuve à 30°, elle est réensemencée dans deux matras à fond plat où le bouillon 
est étalé en couche mince (1). L'un des matras est laissé à l'air et l’autre transvasé de 
nouveau dans un tube à vide où l’on raréfie l'air. On procède ainsi pendant sept géné- 
rations successives. Or toutes les cultures ainsi obtenues avec une semence ayant 
végété dans l'air raréfié sont restées asporogènes. 
» D’après ces faits et contrairement aux prévisions, l’action de Pair 
raréfié semble plutôt défavorable qu’utile à la réapparition des spores. Il 
fallait donc avoir recours à d’autres procédés. On sait que, dans le sang 
des animaux morts du charbon et exposé à lair, la sporulation du Bacillus 
anthracis a lieu très rapidement. D'autre part, j'ai constaté que les premières 
cultures rendues asporogènes par la chaleur redevenaient qu el quefois 
sporogènes après avoir passé par le cobaye, surtout quand l’ensemence- 
ment était fait avec un léger exces de sang. La voie était donc tout indiquée 
pour de nouvelles expériences. Elles ont pleinement réussi, 
Voici comment elles ont été exécutées : 
» Le bouillon ordinaire de culture est étalé en couche mince, dans des matras à 
fond plat, et est additionné de quelques gouttes de sang frais de cobaye sacrifié à cet 
effet. Les matras sont mis à l’étuve pour être éprouvés; ils y séjournent jusqu’à lense- 
mencement. Dans ces conditions, la composition du bouillon subit des modifications 
qui se traduisent à l'œil par une coloration de plus en plus foncée. Ces modifications, 
loin d’être nuisibles à l'effet cherché, semblent plutôt en favoriser l'apparition. Ce 
(1) Comme M. Chauveau l’a montré, c’est là une condition très favorable à la for- 
mation des spores. 
