— 413 — 



diata l'azione su alcune tossine e specialmente tossina difterica, tossina tetanica, prodotti 

 tossici in genere dello stofìlococco dorato, del gruppo coli-tifo. 



Le sostanze furono anche provate su alcune infezioni sperimentali negli animali. 



Le ricerche in vitro furono fatte con diversi substrati di cultura e più specialmente 

 brodi comuni, (infuso carne o brodo di carne o brodo con Liebig e peptone Witte,) con 

 agar-agar, con gelatina. Per alcuni microrganismi, gruppo coli-tifo, difterite, furono ado- 

 perati altri substrati, specie per i controlli: Conradi-Df igalsky, siero di sangue etc. 



Le culture vennero fatte od in tubi d'assaggio, od in matriccini Erlenmeyer, o 

 nelle capsule. In tutte le ricerche poi per le seminagioni furono usate culture virulenti, 

 recenti di 24 ore. 



Le sostanze fluorescenti che io specialmente adoperai, perchè più facili ad aversi allo 

 stato di purezza, furono la fìuorescina, l'eosina (a fluorescenza giallo e bleu,) ed il bleu di 

 metilene: furono adoperate, ma più per ricerche comparative, anche le altre sostanze indicate. 



Le sostanze erano sciolte in acqua distillata nelle proporzione di 1 : 100 e sterilizzate. 

 Per avere delle diluzioni esatte e costanti, i vari substrati culturati sia liquidi che solidi 

 venivano posti in provette in quantità di 10 cm. :i oppure in matraccini nelle quantità di 

 100 era' e con contagoccie calibrati si aggiungevano le soluzioni fluorescenti in modo di 

 avere diluzioni variabili da 1: 100 - 1 : 500 - 1: 1000 - 1: 2000 - 1: - 5000 1 : - 10 000. 

 1 materiali così colorati venivano di nuovo sterilizzati e posti per qualche giorno nella stufa 

 a 37° per assicurarsi della sterilità 



Le seminagioni venivano sempre fatte colla stessa quantità di culture recenti di 24 

 ore : due anse quando si trattava di culture in substrato solidi, cinque goccie se si trat- 

 tava di culture liquide, e venivano poi contemporaneamente seminate un certo numero di 

 culture, di cui parte servivano per controllo, parte venivano esposte alla luce diffusa del 

 giorno, parte erano tenute all' oscuro, o in una stufa chiusa od involte in carta nera. 



Per stabilire 1' azione esercitata dalle sostanze studiate, se si trattava di prove fatte 

 in substrati liquidi, dopo 24, 48. 72 o più ore si scuotevano fortemente le culture in modo 

 da avere una distribuzione omogenea dei microrganismi, e si seminavano delle capsule con 

 un determinato numero di goccie di cultura e quindi si osservava lo sviluppo: se invece 

 le ricerche erano fatte con substrati solidi, se ne seguiva direttamente lo sviluppo nelle 

 capsule. 



Contemporaneamente veniva studiata la morfologia del microrganismo : le eventali 

 variazioni venivano studiate in goccia pendente, e le prove d' agglutinazione erano fatte 

 sia nei tubi, sia al microscopio, i fenomeni di batteriolisi seguiti al microscopio. 



Veniva poi saggiata la virulenza mediante la prova d'innesto negli animali colle do- 

 vute norme e precauzioni a secondo dei casi. 



Le ricerche furono continuale per molto tempo, e con diversi microrganismi di varia 

 provenienza; i risultati ripetutamente controllati, condizione questa necessaria, causa le dif- 

 ferenze spesso grandissime che si hanno nelle diverse prove, differenze legate specialmente 

 alla intensità della luce diffusa, alla composizione del substrato, ed ai diversi microrga- 

 nismi, ed anche ai vari ceppi di uno stesso microrganismo. Appunto per questi fatti si 

 incontrano non poche difficoltà. 



