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La determinazione coi multipli dell’ unità infettante presenta anche il 
vantaggio di togliere qualunque incertezza nei risultati, data la forte quan- 
tità di virus che si introduce : d’ altra, parte tutte le cagioni di oscillazione 
che abbiamo fatto notare quando si fa uso di una infezione minima, ven- 
gono, nel caso dei multipli, per compensazione reciproca, ad attenuarsi. 
Un vantaggio non insignificante è il risparmio del siero, giacché, vo- 
lendo operare col virus fisso, bisogna impiegare per ogni animale in media 
20 eme. di siero per la via della pelle, laddove per la determinazione in 
vitro bastano piccole frazioni di centimetro cubo. 
Noi quindi per la determinazione del siero che veniamo fabbricando, 
adoperiamo ora, quasi esclusivamente, il metodo del contatto, fatto sempre 
col virus fisso, iniettando la mescolanza sotto la dura madre cerebrale. 
Come base del calcolo noi prendiamo il numero di unità infettanti che 
un cme. del siero in esame é capace di neutralizzare. Praticamente la 
mescolanza non può farsi emulsionando direttamente un pezzetto di virus 
fisso nel siero, perchè questo virus, sotto il minimo volume, contiene un 
‘“ gran numero di unità infettanti e richiederebbe perciò un volume ragguar- 
devole di siero. Si mescola invece il siero ad una data diluzione nell’ acqua. 
del virus stesso. l 
Nelle prime esperienze noi mescolavamo una parte di siero con 10, 
20, 30 parti di emulsione di virus fisso a 1:10 000, rapporto che veniva a 
rappresentare un eme. di siero mescolato con 800, 1600, 2400 unità infet- 
tanti. Per iniettare colla mescolanza una unità infettante del virus, bastava 
aumentare appena sensibilmente la solita dose di emulsione impiegata, 
giacché il siero rappresentava una minima parte del volume totale. 
Ma per fare le esperienze coi multipli, cioé per introdurre una tal quantità 
della mescolanza che venga a contenere più unita infettanti, non si può di- 
luire troppo il virus per non ingrossare eccessivamente il volume del liquido 
da introdurre sotto la dura madre: noi abbiamo perciò usato le diluzioni di 
1:50 200, proporzionando a questo aumento la quantità di siero da mescolare. 
Per le ultime esperienze sul nostro ST. fatte col virus fisso la cui di- 
luzione limite è 1:5000, abbiamo trovato comodo servirci della diluzione 
1:1000 (cinque unità infettanti) mescolata col siero ordinariamente nel 
1 Il 
rapporto: di di S=S Li» Lis» 
in contatto con 400, 800, 1400, 3200 unita infettanti. Ed iniettando colla 
mescolanza sempre 5 unita infettanti, veniamo ad accoppiare alla facilità 
di preparazione, per la semplicità del rapporto, anche la sicurezza maggiore 
dei risultati, per il multiplo dell’ infezione minima impiegato. 
Quanto alla durata del contatto, noi sul principio adottavamo un pe- 
riodo di 24 ore alla temperatura ambiente; poi avendo riconosciuto, ana- 
logamente a quanto si sa per altre infezioni, essere l’ azione del siero in- 
che viene a corrispondere a 1 cme. di siero 
