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microrganismi variano moltissimo da epidemia ad epidemia, da caso a 
caso e tutti gli autori richiamano l’ attenzione sopra questo fatto. Nella 
difterite poi questa differenza è notevole, e perciò bisogna procurarsi un 
conveniente materiale primo. Come fanno notare anche Roux e Yersin 
non si possono dare norme generali per questa scelta, è necessario iso- 
lare il bacillo da molti casi di difterite (naturalmente scegliendo i casi più 
gravi) ed esperimentarne la virulenza e il potere tossico sugli animali. 
Il materiale primo di studio a me venne fornito o da casi tipici di 
difterite denunciati all’ Ufficio d’ Igiene, o da ammalati degenti all’ Ospedale 
dei difterici, o da culture originali che potei avere dall’ estero. Per 1’ iso- 
lamento del bacillo dalle placche difteriche, come anche per la diagnosi, 
io uso o lo siero coagulato o l’ agar-agar. Lo siero del sangue certo ser- 
ve molto bene e quando non sia soverchiamente coagulato, deve preferirsi 
agli altri substrati. 
Anche l’ agar-agar però quando è convenientemente preparato e spe- 
cialmente quando ha il voluto grado di alcalinità (parlando della prepa- 
razione delle tossine vedremo qual’ é questo grado) serve benissimo; ul- 
timamente anzi, specialmente per lo scopo diagnostico, mi servo quasi 
esclusivamente dell’ agar-agar. 
Avute le colonie isolate é necessario fare una serie di passaggi in 
brodo, ripetuti a piccoli intervalli, dapprima ogni 36-48 ore, poscia ogni 
24 ore e quindi saggiarne il grado di virulenza sugli animali, specialmente 
sulla cavia. i 
Le ultime culture di cui mi servii per la preparazione delle tossine, re- 
centi di 24-36 ore, ammazzano le cavie di 400-500 grammi in 48 ore alla 
dose di 0,2-0,15: nella dose di 0,1 le cavie muoiono in terza o quarta 
giornata: alla dose di 0,75 in quinta giornata. La virulenza di queste cul- 
ture come si vede é molto forte. 
DO 
Preparazione delle tossine, determinazione del loro potere tossico, 
conservazione delle medesime 
Nella preparazione delle tossine,* qualunque sia il metodo che si ado- 
pera, s’ incontrano serie «difficoltà, non già nella manualità tecnica, ma 
per poter avere il voluto grado di tossicità. Sappiamo infatti che secondo 
Behring ed Ehrlich le tossine per lo meno devono ammazzare in modo 
acuto 1000 gr. di cavia alla dose di 0,3; e che secondo Roux le tossine 
devono ammazzare le cavie di 500 grammi in 48 ore alla dose di 0,1. 
