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Ora per poter ottenere delle tossine dotate di questa virulenza e per con- 
servare questo grado di tossicità negli ulteriori passaggi, deve essere 
soddisfatta una serie di condizioni. 
I punti principali da ‘prendere in considerazione sono i seguenti: 
Virulenza e qualita tossiche delle culture prima che si adoperino per le 
seminagioni: Composizione e sovratutto grado di alcalinità dei brodi: 
Purezza assoluta delle culture: Temperatura della ‘stufa: Azione della 
luce. 
Le culture prime, come già si disse, devono avere una grande viru- 
lenza, ma non basta: devono essere capaci di produrre moltissimo ve- 
leno difterico. Le culture recenti della stessa o quasi eguale virulenza, non 
danno sempre la stessa quantità di tossina, come pure la tossina non é 
sempre proporzionale allo sviluppo più o meno rigoglioso delle culture. 
È quindi necessario istituire delle prove preliminari, saggiando il po- 
tere che hanno le diverse culture, dimostrate fortemente virulenti, di pro- 
durre tossina. La produzione della tossina deve essere un fenomeno molto 
complesso ed assai complicato, poiché si notano delle differenze enormi, 
nei diversi matracci, anche colle stesse culture e cogli stessi bResio ue 
sogna quindi andare molto guardinghi. 
Une delle prime condizioni necessarie però é la virulenza delle cul- 
ture prime ed il loro forte potere di produrre tossina. Queste culture poi 
devono essere convenientemente conservate, e devono sempre essere rin- 
frescate prima delle seminagioni definitive. Il miglior modo di conservarle 
@ di fare, ogni 15 giorni circa, dei passaggi freschi e poi conservarle in 
tubetti chiusi alla lampada fuori dalle stufe, in ambiente piuttosto fresco 
e fuori dalla luce. 
Ogni qualvolta poi si devono fare le seminagioni definitive nei matracci 
per le tossine è necessario fare 3 o 4 passaggi freschi ogni 24 ore, assi- 
curandosi sempre della purezza delle culture con controlli in agar-agar 
od in siero. 
La composizione e sovratutto il grado di alcalinità dei brodi hanno 
un’ importanza capitale. 
La preparazione del brodo si fa nel solito modo: 1 kilogr. di carne 
magra tagliuzzata, 2 litri di acqua, si lasciano in infusione 12-24 ore, quindi 
si fanno bollire, si lascia raffreddare e si filtra. Si aggiunge l’ 1 o 2 p. 
/ di peptone) il 04 pi Adiliclorure Nidi isodiore tinaleci e gditiostia Logi 
potassa. 
In questa preparazione bisogna adoperare carne bovina e fresca, man- 
tenere la proporzione di 1 parte di carne per 2 di brodo, non allungarlo 
maggiormente, usare un peptone buono (o peptone Witte, o Chapo- 
teaux o Gribler). La percentuale del peptone non ha molta importanza, 
