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io adopero in genere da gr. 12 a gr. 15 per litro di brodo; e io uso il 
peptone Witte. 
L’ alcalinizzazione é la parte più importante, quella che esige le mag- 
giori precauzioni, e le tossine spesso non sono molto attive e mano mano 
si attenuano, appunto in causa del grado di reazione del brodo. 
Le indicazioni che si danno dagli autori su questo punto sono un 
po’ vaghe. Si dice che i brodi devono essere piuttosto alcalini, fino ad avere 
un principio di reazione colla fenoltaleina; in quanto all’ alcali da ado- 
perare alcuni consigliano l’ idrato di Ka, altri quello di Na, altri il carbonato; 
altri infine consigliano di ottenere dapprima la neutralizzazione colla po- 
tassa caustica, quindi il voluto grado di alcalinità col carbonato di sodio. 
Io, per quel poco che ho potuto osservare, dò le seguenti norme. 
Innanzi tutto i brodi non devono essere troppo alcalini, devono essere 
leggermente alcalini. I brodi resi alcalini fino a dare la reazione in pro- 
vette colla fenoltaleina in soluzione, sono’ troppo alcalini. Colla carta di 
fenoltaleina si giudica un po’ meglio il grado di alcalinità, ma bisogna 
andare molto guardinghi e non oltrepassare un certo grado di alcalinità, 
altrimenti le tossine riescono troppo deboli. 
Un processo di alcalinizzazione che serve abbastanza bene è il seguente : 
Si ottiene dapprima una neutralizzazione per quanto é possibile esatta 
con soluzioni sature di carbonato di sodio o meglio di potassa caustica. 
È necessario usare carta reattiva molto sensibile: la carta di tornasole 
rossa deve diventare lievemente bleu, la carta di tornasole bleu deve di- 
ventare leggermente rossa. 
In questa operazione é conveniente stabilire prima approssimativa- 
mente, mediante un dosamento volumetrico la quantità di soluzione alca- 
lina necessaria per avere la neutralizzazione. È indifferente usare la po- 
tassa caustica o la soda od il carbonato; forse però serve meglio la po- 
tassa caustica. 
Così ottenuta la neutralizzazione si aggiungono 10 centim. cubici per 
litro di soluzione al 10 p. % di carbonato di sodio. 
Il grado di alcalinità in questo modo é abbastanza manifesto, ma non 
troppo forte ; la carta di tornasole rossa diventa bleu, la carta di fenol- 
taleina, se é buona, dà la reazione caratteristlca, ma come ripeto non bi- 
sogna oltrepassare il grado di alcalinità. 
Assicurata la virulenza e la tossicità delle culture prime e preparato il 
brodo del grado di alcalinità sopra ricordato, si procede all’ allestimento 
propriamente detto delle culture in massa, che devono produrre la 
tossina. 
Per la preparazione delle tossine si usa tanto il processo di Behring 
e sua scuola, che quello di Roux. 
