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Per il processo Behring viene seminata, colle culture recenti so- 
pradette, una serie di matracci comuni a pallone della capacità di un li- 
tro e contenenti circa 350-400 eme. di brodo. Detti matracci sono posti 
nella stufa a 36-37° per uno spazio di tempo oscillante da 6 a 8 settima- 
ne, quindi lasciati depositare a temperatura ambiente coll’ aggiunta del 
Vi p.% di fenolo e finalmente decantati. 
Per il processo Roux le culture vengono fatte come sopra, ma in 
matracci di Fernbach ed in una corrente d’ aria umida per 3-4 setti- 
mane, quindi filtrate attraverso candele di Chamberland. 
Anche in questa parte del lavoro però bisogna avere una serie di pre- 
cauzioni. Innanzi tutto la temperatura del termostato deve essere per 
quanto è possibile costante, quindi sono da consigliare grandi termostati 
con termoregolatore bimetallico. La temperatura poi non deve oltrepassare 
1 37°, è meglio si avvicini ai 36° ed anche ai 35°, che ai 38° o 39°. Le tos- 
sine ottenute a temperature relativamente basse, sono molto più attive 
«di quelle ottenute a temperature appena un po’ elevate. 
La purezza delle culture poi ha un’ importanza massima: basta il mi- 
nimo inquinamento per distruggere completamente il potere tossico di una 
«cultura. È perciò sempre necessario, quando si fanno i passaggi e special 
mente quando si fanno le seminagioni definitive, istituire delle culture di 
controllo sull’ agar; come pure è necessario, passato il lasso di tempo so- 
pradetto, prima di filtrare le tossine o trattarle col fenolo, di assicurarsi 
ancora della purezza coll’ esame microscopico e colle culture su agar-agar 
o su siero. L’ esame microscopico può incominciare a dare un criterio, ma 
non é sufficiente, perché la morfologia del bacillo della difterite, special- 
mente in queste vecchie culture diventate anche fortemente alcaline, è 
molto poco studiata e conosciuta. Le culture sull’ agar invece fanno pro- 
nunciare un giudizio assoluto. 
Le culture col metodo di Behring, quando il materiale di semina- 
gione fu puro e quando la tecnica batteriologica seguita fu scrupolosa, 
si mantengono pure; quelle di Roux invece facilmente s’ inquinano, bi- 
sogna raddoppiare di precauzione ed è molto conveniente far dapprima 
filtrare |’ aria attraverso del cotone o ad un filtro solubile, quindi in una 
prima bottiglia di lavatura contenente o glicerina od una soluzione di su- 
blimato, e per ultimo in una bottiglia di acqua: va senza dirlo che tutto il 
sistema di filtrazione e lavaggio dell’aria deve essere sterilizzato. La corrente 
.d’ aria poi deve essere moderata. 
Allorquando le culture sono state nei termostati il tempo sopra indicato, 
con o senza corrente d’ aria, prima di passare alla filtrazione od al trat- 
tamento coll’ acido fenico, è necessario assicurarsi della purezza delle cul- 
ture sia mediante l’ esame microscopico che mediante le culture. L’ esame 
