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microscopico si fa a fresco e tanto senza colorazione che col metodo Roux 
e ci fornisce criteri già importanti, dedotti specialmente dalla morfologia, 
dalla mobilità e dalla disposizione dei microrganismi, ma non sono com- 
pletamente sicuri. La morfologia del bacillo della difterite in questi vecchi. 
mezzi di cultura diventati molto alcalini è poco studiata, anche i caratteri 
della mobilità o meno non possono essere applicati rigorosamente, la di- 
sposizione, il raggruppamento sono più costanti e caratteristici ma tuttavia, 
come ripeto, questi dati dell’ esame microscopico non sono sufficienti ed è 
necessario, o per lo meno molto prudente, ricorrere alle culture in placca 
O per strisciamento sull’ agar-agar o sul siero. Io adopero, per ora almeno, 
quasi esclusivamente |’ agar, il quale quando ha il grado voluto di alcali- 
nita come sopra indicai, é un mezzo di cultura adattatissimo per il bacillo: 
della difterite. I criteri che ci vengono forniti dalle culture sono assoluti : 
l’ aspetto delle colonie, il loro modo di sviluppo, l’ esame microscopico 
delle colonie fanno pronunciare un giudizio assoluto di purezza o meno 
delle culture. 
Assicurata la purezza delle culture si passa alla loro filtrazione, oppure 
si aggiunge il fenolo nella proporzione del 0,5 %,. 
Per la filtrazione le culture vengono dapprima filtrate su carta e quindi 
attraverso le candele Chamberland. Va senza dirlo che tutto va ste- 
rilizzato. 
Quando poi le culture vengono filtrate su filtro Chamberland bisogna 
usare molte precauzioni. Possibilmente conviene ottenere la filtrazione per 
aspirazione mediante una pompa a caduta d’acqua, altrimenti si usa il 
comune filtro Chamberland a pompa d’aria aspirante e premente, ma 
in questo caso bisogna adoperare una pressione moderata e metodica. In 
ogni modo poi è necessario eliminare il contatto dell’ aria ed impedire 
qualunque inquinamento, altrimenti le tossine si intorbidano subito ed il 
potere tossico rapidamente diminuisce. Le tossine filtrate si conservano. 
benissimo coll’ aggiunta del 0,2 o 0,3 p.% di fenolo purissimo. Ultima- 
mente io aggiungo sempre questa dose minima di acido fenico, dose la 
quale non ha alcun significato pel cavallo e che elimina un inconveniente 
seriissimo. 
Le tossine poi vanno conservate in luogo fresco e fuori dal contatto della 
luce; d’ estate è meglio metterle in ghiacciaia. 
Le tossine che potei ottenere e di cui mi servii per le immunizzazioni: 
hanno un fortissimo potere tossico. Quelle ottenute col metodo di Behring 
ammazzano sicuramente in modo acuto (48-56 ore) 1000 gr. di cavia alla 
dose di 0,25 cme.: quelle avute col metodo di Roux ammazzano le cavie 
di 500. sr. in 43. ore alla dose di 0,1 cme. 
Ultimamente ebbi delle tossine ancora più forti: le cavie alla dose in- 
