Über das Vorkommen von Amide spaltenden Enzymen usw. 387 



Isolierung der betreffenden -Enzyme vorläufig nicht angestrebt. 

 In allen meinen Versuchen ließ ich daher die zerriebenen oder 

 mit Aceton abgetöteten Mycelmassen von Aspergillus niger, unter 

 strenger Durchführung der Antiseptik, auf verschiedene Stickstoff- 

 verbindungen einwirken. 



In einer Reihe von Fällen wurde die von der Kulturflüssigkeit ab- 

 gehobene Pilzmasse in ein feinmaschiges Sich gebracht, kurze Zeit einem 

 starken Wasserstrome ausgesetzt, um sie möglichst von den Konidien zu 

 befreien und die letzten Spuren von Kulturflüssigkeit zu entfernen, dann 

 durch Pressen so entwässert, daß sie leicht zu einem groben Pulver zer- 

 rieben werden konnte. Ein bestimmtes Quantum dieses nahezu luft- 

 trockenen Pilzpulvers wurde mit 10 bis 25 cem Wasser und etwas Kiesel- 

 gur gründlich verrieben. Die so erhaltenen dickbreiigen Flüssigkeiten 

 kamen in ein mit Korkverschluß versehenes Kölbchen mit der zu prüfenden 

 Substanz und 2 bis 4 Proz. Toluol als Antiseptikum. Die Kölbchen wurden 

 während bestimmter Zeitintervalle im Thermostaten gehalten. Die Flüssig- 

 keiten erwiesen sieh nach der Digestion als absolut keimfrei. 



In anderen Fällen habe ich die von R. und W. Albert und 

 E. Buchner zum Nachweis der Hefezymase so erfolgreich aus- 

 gearbeitete Acetonmethode*) in Anwendung gebracht. 



Die in oben beschriebener Weise entwässerte und zerkleinerte Pilz- 

 substanz wurde in das mehrfache Volumen reinen Acetons eingetragen 

 und unter häufigem Umrühren und einmaligem Wechsel der Flüssigkeit 

 15 Minuten lang darin belassen. Die vom Aceton abfiltrierte Pilzsubstanz 

 wurde durch Pressen zwischen Filtrierpapier vom Rest der Flüssigkeit 

 befreit, dann mit Äther wiederholt gewaschen. Nach Verdunsten des 

 Äthers wurde die Masse zu feinstem Pulver zerrieben und über Nacht im 

 Thermostaten gehalten. Dieses Präparat ist im folgenden als Acetonpilz- 

 pulver bezeichnet, in einigen Fällen habe ich die Pilzsubstanz, direkt 

 bei 37° C getrocknet und fein pulverisiert, angewandt. Eine bestimmte 

 Menge des Pilzpulvers wurde mit 10 bis 20 cem Lösung der zu prüfenden 

 Substanz, unter Zusatz von Toluol , im gut verschließbaren Kölbchen im 

 Thermostaten gehalten. 



Mit der gekochten Pilzsubstanz wurden Kontrollversuche, 

 unter sonst gleichen Bedingungen, angestellt. 



Nach Beendigung der Versuche wurde eine quantitative Be- 

 stimmung des entstandenen Ammoniaks ausgeführt. Sie geschah 

 in den filtrierten Versuchsflüssigkeiten , wenn es zulässig war, 

 durch Destillation mit Magnesia; eine Vio-Normal-Schwefelsäure- 

 lösung diente dabei zur Absorption des Ammoniaks. Die Harn- 

 stoffderivate und Säureamide konnten jedoch nicht in dieser Weise 

 behandelt werden, weil sie oft schon bei gelindem Erwärmen mit 

 Magnesia teilweise Zersetzung erleiden. Bei den Versuchen mit 

 den genannten Verbindungen kam deshalb die Schlö sing sehe 

 Methode ausschließlich zur Anwendung. Die filtrierte Flüssigkeit 



*) H. u. E. Buchner u. M. Hahn, Die Zymasegärung, S. 266. 



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