über tierische Tyrosinasen und ihre Beziehungen zur Pigmentbildung. 2o7 



halb einer Viertelstunde eine dunkelschiefergraue Färbung an und 

 am nächsten Tage hatte sich ein reichlicher dunkler Niederschlag ab- 

 gesetzt: die Proben von A waren dagegen unverändert geblieben. Es 

 folgt daraus, dal's das Chromogen durch Phosphorwolframsäure nicht 

 gelallt wird. 



Zum Zwecke weiterer Fraktionierung wurde eingeengt, das mehr- 

 fache Volumen Alkohol und etwas Aether hinzugefügt, der reichliche 

 weifse Niederschag mit Alkohol gewaschen und in 6 ccm Wasser gelöst ( C), 

 das Filtrat wurde eingedampft, und der Rückstand in 6 ccm Wasser auf- 

 genommen (D). C und _D wurden nun wiederum wie oben mit frisch 

 bereiteter Fermentlösung in Bezug auf ihren Chromogengehalt verglichen 

 und es ergab sich, dafs C gar kein Chromogen, D jedoch reichliche 

 Mengen davon enthielt. Weder in C noch in D war auch nur eine 

 Spur von Tyrosin durch die so sehr empfindliche Millon sehe Reaktion 

 nachweisbar. Lösung D gab mit Schwermetallsalzen, auch mit Queck- 

 silberacetat und ammoniakalischer Silberlösung keinen Niederschlag, 

 ebenso wenig mit starkem Bromwasser. Auf die Gegenwart einer aro- 

 matischen Substanz deutete das Auftreten einer Gelbfärbung beim Kochen 

 mit Salpetersäure, die beim Übersättigen mit Ammoniak in ein inten- 

 sives Orange umschlug. Lösung C zeigte keine Spur dieses Verhaltens. 



Es ergiebt sich sonach, dafs das Chromogen des Lepidopteren- 

 blutes als eine weder durch Phosphorwolf ramsäure , noch durch 

 Schwermetallsalze, ammoniakalische Silberlösung oder Bromwasser 

 fällbare, in wasserhaltigem Alkoholäther lösliche, anscheinend der 

 aromatischen Reihe angehörende, jedenfalls nicht mit dem Tyrosin 

 identische Substanz anzusehen ist. 



5. Das durch Tyrosinase aus Tyrosin entstehende Melanin. 



Als nächste Aufgabe ergab sich die genauere Feststellung 

 der Natur jenes Umwandlungsproduktes, das durch Ein- 

 wirkung des besprochenen Enzymes auf Tyrosin entsteht. 



Zu diesem Zwecke wurden nach dem beschriebenen Verfahren 

 Fermentlösuugen bereitet, derart, dafs das Volumen einer solchen, 

 entsprechend einem Ausgau gsmaterial von je 20 bis 40 Deiliphila- 

 Puppen, 10 bis 20 ccm betrug. Die frisch bereitete Fermentlösung 

 wurde sogleich mit einigen Decigramm reinen, fein gepulverten 

 Tyrosins versetzt und im Schüttelapparate vier bis sechs Stunden 

 kräftig geschüttelt. Schon nach kurzer Zeit stellte sich die 

 charakteristische Violettfärbung ein und nach einiger Zeit hatte 

 sich ein reichlicher schwarzer Niederschlag abgesetzt, während die 

 überstehende Flüssigkeit klar und farblos erschien und bei weiterem 

 Schütteln mit Tyrosin keine Farbenveränderung mehr zeigte. 



Bei näherer Untersuchung ergab es sich, dafs die schwarzen 

 Flocken in ihrem Inneren erhebliche Mengen unveränderten Tyrosins 



