72 Friedrich Krüger, 



Mengen der ursprünglichen Hämoglobinlösung stets die gleichen 

 Mengen Wasser resp. Reagens hinzufügte. Wurde z. B. zur ur- 

 sprünglichen Oxyhämoglobinlösung auf 5 ccni 10 com Wasser hin- 

 zugesetzt, so erhielt man die Lösung der betreffenden Derivate, 

 indem zu 5 ccm derselben OxyhämoglobiElösung x ccm Reagens 

 und dann 10 — x ccm Wasser gethan wurden. 



Weit schwieriger ist es, eine der ursprünglichen Oxyhämo- 

 globinlösung genau entsprechende Chloroformniederschlaglösung 

 zu erhalten, da geringe Verluste beim Auswaschen desselben auf 

 der Centrifuge fast unvermeidlich sind. Um diese Verluste auf 

 ein Minimum zurückzuführen, verfuhr ich folgendermafsen: 



Aus einer abgemessenen Quantität (100 ccm) der ursprünglichen, 

 konzentrierten Oxyhämoglobinlösung wurde der Blutfarbstoff durch 

 Schütteln mit Chloroform vollständig zur Fällung gebracht und nach 

 24 Stunden die abgestandene, trübe Flüssigkeit vom Niederschlag ab- 

 gegossen und durch ein Filter von dickem schwedischen Filtrierpapier 

 filtriert. Das Filtrat war stets vollkommen klar und farblos. Der im 

 Mischcylinder zurückgebliebene dicke , breiige Niederschlag , der eine 

 grofse MeDge Chloroform in sich schlofs, wurde mit Wasser aufgerührt 

 und in die Gläser der Centrifuge gebracht. Nach ungefähr halb- 

 stündigem Centrifugieren bei etwa 1500 Umdrehungen in der Minute 

 haben sich in den Centrifugengläsern drei Schichten gebildet. Die 

 unterste Schicht besteht aus Chloroform , darauf folgt die Schicht des 

 Niederschlages und dann die von suspendierten Partikelchen getrübte 

 Waschflüssigkeit. Letztere wurde abgegossen und gleichfalls durch 

 das oben erwähnte Filter filtriert. Zur Entfernung des abgesetzten 

 Chloroforms wurde der ziemlich fest zusammengeprefste Niederschlag 

 mit einem Glasstabe von den Wänden des Cylinders abgelöst, worauf 

 das Chloroform sich mit Leichtigkeit abgiefsen liefs. Der im Nieder- 

 schlag zurückbleibende Rest des Chloroforms wurde durch vielfaches 

 (10- bis 15 maliges) Auswaschen auf der Centrifuge entfernt, wobei jedes- 

 mal die trübe Waschflüssigkeit durch das gleiche Filter filtriert wurde. 



War der Niederschlag frei von Chloroform und ein weiteres Centri- 

 fugieren überflüssig, so wurde zunächst die auf dem Filter gesammelte 

 geringe Menge des Niederschlages auf dem Filter selbst in möglichst 

 wenig 0,2 proz. Sodalösung zur Lösung gebracht, abfiltriert und einige 

 Mal mit kleinen Portionen Sodalösung nachgewaschen. Das gesamte 

 Filtrat wurde mit dem in den Centrifugengläsern verbliebenen Nieder- 

 schlag vereinigt und 0,2 proz. Sodalösung bis zum halben Volumen 

 der konzentrierten Hämoglobinlösung, das in Anwendung gekommen 

 war, aufgefüllt. Nach vollständiger Lösung des Niederschlages wurde 

 Wasser hinzugesetzt, bis das ursprüngliche Volumen der Hämoglobin- 

 lösung erreicht war. Der Gehalt an Soda in der Lösung des Chloroform- 

 niederschlages betrug somit nur 0,1 Proz. 



Die saure Lösung wurde entweder in derselben Weise her- 

 gestellt unter Anwendung von sehr verdünnter Essigsäure statt 



