Über die Wirkungsweise des Trypsins. 157 



wurde auf der Scbüttelmaschine gut durchgeschüttelt und dann während 

 5 bis 6 Tagen der Autodigestion überlassen. [Es stellte sich dabei heraus, 

 daß, je länger die Autodigestion anhielt, um so unwirksamer die Trypsin- 

 lösung wurde. Dauerte die Selbstverdauung länger als 10 Tage, so war 

 das Trypsin zerstört] Nach dieser Zeit wurde koliert und so lange 

 filtriert, bis eine klare Flüssigkeit resultierte. Diese enthielt noch reichlich 

 Eiweiß. Um letzteres zu entfernen, wurde die Flüssigkeit mit gesättigter 

 Uranylacetatlösung und dann sofort, um die Reaktion alkalisch zu erhalten, 

 mit Natriumphosphat versetzt. Es entstand ein voluminöser Niederschlag, 

 der das Trypsin enthielt. Von diesem wurde abfiltriert, der Filterrückstand 

 in der Reibschale mit 0,2-proz. Natriumkarbonatlösung ausgezogen. Dabei 

 geht sämtliches Ferment in die Karbonatlösung über. Um eine möglichst 

 gut wirkende Fermentlösung zu erhalten, ist es notwendig, den Nieder- 

 schlag mindestens 12 Stunden mit der Karbonatlösung stehen zu lassen. 

 Das Filtrat ist dann sehr wirksam. 



Die Verdauungskraft der so dargestellten, keine Biuretreaktion dar- 

 bietenden Lösungen wurde regelmäßig geprüft, indem ich 5 ccm derselben 

 unter Toluol auf ein Mettsches Röhrchen, das koaguliertes Pferdeblut- 

 serum*) enthielt, einwirken ließ. Meine Trypsinlösungen pflegten bei 40° 

 in 24 Stunden 8 bis 10 mm der Eiweißsäule zu lösen. 



IL Versuche. 



Die Versuche betreffs Einwirkung des Trypsins auf die zu 

 untersuchenden Stoffe wurden so angestellt, daß etwa 0,1 bis 0,3 g 

 Substanz mit 5 bis 10 ccm Trypsinlösung versetzt und mit Toluol 

 überschichtet wurden. Um sicher zu sein, daß nur das Trypsin 

 eine etwa eingetretene Spaltung bewirkt hatte, wurden regelmäßig 

 Kontrollversuche derart angestellt, daß dieselbe Menge Substanz 

 mit 5 bis 10 ccm der gleichen Trypsinlösung, nachdem sie 7 2 Stunde 

 lang am Rückflußkühler gekocht hatte, zusammengebracht wurde. 

 Die Mischungen wurden im Brutofen in Reagenzgläsern oder 

 kleinen Kölbchen digeriert. Über die Art und Weise, nach der 

 auf eine etwa eingetretene Spaltung geprüft wurde, werde ich 

 besonders bei den einzelnen Gruppen der Stoffe berichten. 



1. Hippursäure. 

 Im Laboratorium von Nencki hatte Blank**) gefunden, daß 

 Hippursäure durch Trypsin in Benzoesäure und Glykokoll sich 

 zerlegen lasse. Dagegen gelang es Gule witsch***) nicht, eine 

 solche Spaltung zu beweisen. Gule witsch vermutet, daß das 

 Trypsinpräparat Blanks mit dem fettspaltenden Fermente ver- 

 unreinigt gewesen sei. Auch mir gelang es nicht, die Spaltung 

 der Hippursäure zu erreichen. 



*) Vergl. (xlaessner, loc. cit. 

 "*) Archiv f. experim. Pathologie 20, 377. 

 ***) Zeitschr. f. physiolog. Chemie 27, 540. 



