ET LA BIOLOGIE DES BACTÉRIES FIXANT L' AZOTE. 225 



tamis fin et on remplit des tubes à essais jusqu'à la hauteur de 5 cm. 

 On verse un peu d'eau pour rendre la terre un peu humide et on stéri- 

 lise les tubes à 150° pendant 45 minutes. Après avoir contrôlé la stéri- 

 lité de la terre par l'ensemencement du bouillon ordinaire et de la solu- 

 tion de Winogradsky, on ensemence la terre abondamment avec une 

 culture atténuée de Clostridium (avec une émulsion d'une culture fraîche 

 sur gélose sucrée). Des tubes à essais pareils sont placés pour plusieurs 

 semaines ou mois: les uns à la température ordinaire dans des condi- 

 tions aérobies, les autres pendant un mois dans le vide à 28° et pendant 

 le temps qui reste à l'accès libre de l'air, à la température ordinaire. Pendant 

 ce temps la terre se dessèche complètement. On ensemence un tube à 

 essai contenant une couche de 7 cm. de solution de Winogradsky 

 avec 2 grammes environ de terre. Habituellement, on constate déjà, 

 12 heures après, une fermentation énergique qui atteint son maximum 

 36 heures après. Les microbes de ce tube manifestent à l'ensemencement 

 un pouvoir fixateur des cultures fraîchement isolées de la terre. Cette 

 méthode longue et complexe de rajeunissement des cultures par passage 

 par la terre s'est montrée toujours bonne pour la régénération complète 

 du pouvoir fixateur disparu. La méthode simplifiée qui consiste dans 

 l'addition de 1 à 2 gr. de terre stérilisée à la solution non azotée qui 

 remplit le tube à essai jusqu'à la hauteur de 6 à 8 cm. est moins sûre. 



Ainsi que l'ont montré les recherches de Winogradsky, Clostri- 

 dium Pasteurianum est un ferment butyrique typique. En décomposant 

 différents hydrates de carbone il produit de l'acide butyrique normale, 

 de l'acide acétique, des traces d'acide lactique et de plusieurs alcools 

 (éthylique, propylique, butylique) et des produits gazeux, de l'hydrogène 

 et de l'acide carbonique. Les proportions dans lesquelles se forment 

 les différents produits varient de l'expérience à l'expérience, sans pré- 

 senter de lien régulier avec la composition du milieu qu'il soit non 

 azoté ou qu'il contienne de l'azote lié (du sel ammoniacal, de l'asparagine 

 ou de la peptone). 



Bredemann qui a eu à sa disposition plusieurs dizaines de Clo- 

 stridium d'origine différente a essayé de trouver des points d'appui pour 

 les délimiter par l'étude des produits qu'ils forment. Mais, malgré les 

 nombreuses expériences qu'il a faites, il n'a pas obtenu de résultats qui 

 auraient pu être généralisés: la composition et les quantités relatives 

 d'acides volatils, d'alcools différents et de produits gazeux varient non 

 seulement d'une race à l'autre, mais aussi d'une expérience à l'autre. 

 Néanmoins certains auteurs se servent de ce caractère. Ainsi, suivant 

 Pringsheim, Clostridium americanum décompose plus lentement les 

 hydrates de carbone que Clostridium Pasteurianum et forme dans ce cas 

 plus de produits gazeux. 



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