LE NATURALISTE 



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2* Temps : Dès que j'ai taillé la tranche de foie, je m'occupe 

 do la fixer c'est-à-dire de tuer et de coaguler les cellules de telle 

 sorte que, fixées dans leurs formes, elles soient préparées à su- 

 bir l'action des réactifs que j'emploierai dans les manipulations 

 ultérieures. Tous les réactifs fixateurs (alcool, bichromates al- 

 calins, acide picriquo, acide osmique, liquide de Flemming, etc.) 

 peuvent être utilisés ; mais ils donnent aux tissus une consis- 

 tance variable trop ferme ou trop molle, de telle sorte que les 

 coupes, dans certains cas peuvent se faire d'une façon très ir- 

 régulière. 



Depuis près d'un an, je me sers d'un fixateur qui est peu em- 

 ployé en France, je ne sais trop pour quel motif, car il fixe ad- 

 mirablement les tissus et leur donne une consistance parfaite 

 pour la coupe. C'est le liquide d'Erlicki dont je crois utile de 

 transcrire ici la formule : 



Bichromate dépotasse 20 grammes. 



Sulfate de cuivre 5 — 



Dissoudre dans un litre d'eau chaude et filtrer la solution re- 

 froidie. 



C'est un excellent fixateur et durcissant pour les objets un 

 peu volumineux, destinés à être inclus dans la paraffine ", la plu- 

 parts des griefs dont on le charge, les taches noires qu'il pro- 

 duirait dans les tissus par exemple, ont été relevés par des 

 gens qui ont mal employé ce réactif. 



Je place donc la tranche de foie dans un flacon contenant 

 100 centimètres cubes de liqueur d'Erlicki et je porte le tout 

 près d'un poêle ou d'une cheminée do façon à ce que le fixa- 

 teur se maintienne tiède. Au bout de vingt-quatre heures je 

 jette le liquide dans lequel se trouvait placée la pièce et je le 

 remplace par du liquide d'Erlicki neuf. Je change encore le li- 

 quide à la fin du deuxième jour, et j'abandonne ensuite la pièce 

 pendant neuf ou dix jours. Le durcissement étant alors suffi- 

 sant, je lave la pièce pendant douze ou vingt quatre heures dans 

 un grand bocal dont je renouvelle l'eau toutes les fois qu'elle 

 se colore en jaune. 



La fixation directe par le liquide d'Erlicki que nous venons 

 d'employer pour le foie est applicable à la plupart des organes ; 

 mais il ne faut pas oublier que certains épithéliums délicats 

 placés dans ces bichromates se détachent des organes comme 

 si le ciment intercellulaire se dissolvait. Bien que cet accident 

 soit très rare avec le liquide d'Erlicki, il suffit qu'il soit pos- 

 sible pour que nous indiquions les moyens de l'éviter. On y 

 parvient facilement en employant le procédé suivant qui m'a 

 toujours réussi. La muqueuse (car c'est toujours au revêtement 

 d'une muqueuse que ces épithéliums appartiennent) est placée 

 directement dans une certaine quantité d'alcool à 90° où elle est 

 abandonnée pendant vingt-quatre heures. Après quoi je la 

 porte dans l'eau pendant quinze minutes d'où je la retire pour 

 la mettre dans le liquide d'Erlicki et continuer les opérations 

 comme s'il n'y avait pas eu de bain d'alcool. C'est l'inverse de 

 ce que font certains histologistes qui placent un tissu dans le 

 bichromate pendant deux jours, puis le portent dans l'alcool. 



3* Temps : Au sortir du bain de lavage, je place la tranche 

 de foie dans 20 grammes d'alcool à 90° que je laisse agir pen- 

 dant un ou deux jours, puis je procède à la coloration en 

 masse, que j'ai l'habitude d'employer pour éviter les difficultés 

 que l'on éprouve pour faire prendre la teinture à des coupes 

 obtenues après inclusion dans la paraffine. 



La meilleure teinture est, à mon avis, le carmin alcoolique 

 au borax de Grenadier : 



Borax 4 grammes. 



Carmin 3 



Eau distillée 100 



Faire bouillir quelques minutes, filtrer et ajouter 100 centi- 

 mètres cubes d'alcool à 90°. Conserver dans un flacon bien 

 bouché. 



Je place donc la tranche de foie dans une petite quantité de 

 la solution carminée contenue dans un flacon à large ouver- 

 ture que je ferme hermétiquement de façon à éviter l'évapora- 

 tion de l'alcool qui entraînerait la précipitation du carmin. En 

 combien de temps la pièce est-elle complètement pénétrée par 

 le colorant? En général vingt-quatre heures suffisent, mais il 

 vaut mieux colorer trop que trop peu et on peut prolonger le 

 séjour dans la teinture, si la pièce est trop volumineuse, jus- 

 qu'à trente-six et quarante-huit heures. 



Quand la coloration est complète je décolore légèrement en 

 lavant la pièce dans de l'alcool à 90° contenant quatre gouttes 

 d'acide chlorhydriquc pour 100. Il faut laisser agir l'alcool 

 acidulé pendant 10 ou 15 minutes. 



4 e Temps : Au sortir de l'alcool acidulé je porte la tranche 

 de foie dans l'alcool à 90" (12 heures), puis dans l'alcool 



absolu. La déshydratation est parfaite au bout de 12 à 

 24 heures. Je verse alors dans une éprouvette cinq centimètres 

 cubes de chloroforme, puis, au moyen d'une petite pipette, je 

 laisse couler tout doucement, à la surface du chloroforme, cinq 

 centimètres cubes d'alcool absolu. Si l'on agit très lentement 

 en ayant la précaution de faire couler l'alcool contre les parois 

 de l'éprouvette, celui-ci se rassemble à la surface du chloro- 

 forme et il so forme deux couches, l'une supérieure, d'alcool 

 absolu, l'autre inférieure, de chloroforme. J'introduis douce- 

 ment la tranche de foie dans la première couche et je la laisse 

 tomber jusqu'à la ligne de séparation des liquides ou elle se 

 maintient en suspension. La pénétration du chloroforme s'ef- 

 fectue, ainsi avec une extrême lenteur : ce n'est que quelques 

 heures après que, les liquides s'étant mélangés par diffusion, 

 la pièce tombe au fond de l'éprouvette. On la transporte alors 

 dans du chloroforme pur qu'on laisse agir pendant 24 heures. 



5 e Temps : Il faut maintenant remplacer le chloroforme par 

 de la paraffine et cela graduellement de façon à bien infiltrer 

 la pièce. On ajoute au chloroforme, dans lequel se trouve 

 encore la tranche de foie, de la paraffine râpée jusqu'à ce qu'il 

 ne s'en dissolve plus à froid, et on place le tout dans un endroit 

 chaud près d'une cheminée ou d'un poêle en hiver, ou au 

 soleil en été. La tranche de foie doit rester dans ce bain au 

 moins 24 heures après quoi on passe au sixième temps de 

 l'opération. 



6 e Temps : Lo sixième temps a pour but de faire pénétrer dans 

 la tranche de foie la paraffine qui servira à faire les coupes. Cette 

 masse doit être choisie avec soin sous peine de nombreux 

 échecs. Je me sers de la paraffine de Dumaige qui possède les 

 qualités d'être très consistarte, parfaitement homogène, et 

 fusible à une température fixe. Celle qui fond à 48° constitue 

 une masse excellente quand la température du laboratoire 

 atteint 17° à 20°. 



Il existe deux méthodes qui permettent d'obtenir une imbi- 

 bition parfaite du tissu par la paraffine. La première, la mé- 

 thode classique, exige le séjour de la pièce dans un bain de 

 paraffine maintenu à l'étuve (instrument coûteux) pendant 

 18 ou 24 heures ; la seconde utilise l'action du vide pour 

 extraire le chloroforme et faire pénétrer la paraffine. Dans les 

 laboratoires on se sert soit d'un instrument compliqué, soit 

 d'une trompe a eau qui exige de l'eau sous forte pression. 



J'emploie une modification de ce dernier procédé que j'ai sim- 

 plifié de façon à le rendre abordable par les travailleurs 

 dépourvus de laboratoire et réduits à leurs propres ressources. 

 Avant de décrire la suite des manipulations, je dois m'arrèter 

 un instant pour faire connaître les pièces du petit appareil à 

 inclusions que nous allons employer. 



Il se compose de quatre parties, savoir : une table à chauf- 

 fer ; une ventouse ; un aspirateur et une veilleuse. 



Fig. 1. — Appareil à inclusions dans la paraffine. T, table à 

 chauffer; P, plaque de verre dépolie; V, ventouse; R, ro- 

 binet; C, capsule; L, veilleuse. 



a) La Table à chauffer est formée d'une lame de métal deux 

 fois recourbée de telle sorte qu'une partie soit horizontale et 

 serve de table proprement dite et deux parties soient verticales 

 et servent de pieds. Sur la partie horizontale se trouve fixée 

 une plaque de verre dont la face supérieure est dépolie. 



