LE NATURALISTE 



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MICROGRAPHIE 



DE LA COLORATION DES ELEMENTS NERVEUX PAR 



LA MÉTHODE DE GOLGI OU PAR LES PROCÉDÉS 



QUI EN DÉRIVENT. 



Deux excellentes méthodes de coloration ont été appli- 

 quées à l'étude du système nerveux : celle de Weigert et 

 celle de Golgi. La première consiste dans la formation 

 d'une laque d'hématoxyline qui colore d'une façon spé- 

 cifique la myéline des fibres nerveuses et dessine ainsi 

 le trajet des faisceaux nerveux ; la seconde, que nous 

 allons étudier avec détail, produit un précipité de chro- 

 mate d'argent à la surface des cellule; nerveuses et de 

 leurs prolongements (cylindre axe et prolongements pro- 

 toplasmiques) : c'est une méthode remarquable qui a 

 permis à certains histologistes de jeter un peu de lu- 

 mière dans l'anatomie du système nerveux. 



I. Méthode lente de Golgi. — La méthode primitive de 

 Golgi ou méthode lente comprend les manipulations 

 suivantes : On place un morceau de système nerveux cen- 

 tral mesurant i centimètre cube de côté. environ, dansdu 

 liquide de Mùller ou simplement dans une solution de 

 bichromate à 2 0/0. On le laisse dans ce bain de 15 à 

 30 jours suivant la température, moins longtemps si la 

 température est élevée, plus longtemps si elle est basse. 

 Dès les premiers jours on a soin d'augmenter les pro- 

 portions debichromate et de les porter à 5 0/0. Au sortir 

 du bichromate, on lave la pièce dans une solution de ni- 

 trate d'argent à 0,25 0/0, puis on la place pendant 2 ou 

 3 jours dans une solution de nitrate d'argent à 0,75 0/0. 

 Onlave dansl'alcool fréquemment renouvelé. On faitles 

 coupes au microtome à l'aide d'un rasoir mouillé d'alcool, 

 on déshydrate avec l'alcool absolu, on éclaircità l'aide de 

 l'essence de térébenthine et on monte les sections dans 

 la résine Dammare au xylol. Il ne faut pas mettre de 

 couvre-objet si l'on veut conserver la préparation colo- 

 rée, car les courants de diffusion qui se produisent sous 

 la lamelle enlèvent les précipités de chromate d'argent 

 qui se sont déposés à la surface des éléments cellulaires. 



II. Méthode rapide de Golgi. — Dans le but d'obtenir 

 plus rapidement des préparations, Golgi remplaça le li- 

 quide de Millier par un mélange de bichromate et d'acide 

 osmique et c'est ce procédé rapide modifié par Ramon 

 et Cajal qui est actuellement le plus employé. 



On durcit la pièce dans le mélange suivant : 



Solution de bichromate à 3 0/0 20 parties 



Solution d'acide osmique à 1 0/0 5 parties 



Le séjour de la pièce dans cette solution placée à 

 l'obscurité doit varier de 24à4S heures pour les pièces 

 provenant d'embryon, mais il doit être d'autant plus 

 long que l'animal est plus âgé. On la porte alors dans 

 une solution de nitrate d'argent à 0,20 0/0 où elle reste 

 24 heures. Immédiatement, sans enlever le nitrate d'ar- 

 gent qui imprègne les tissus, on la porte dans un nou- 

 veau bain moins riche en acide osmique: 



Sol. debichromate de potasse à 3 0/0... 20 parties 



Sol. d'acide osmique à 1 0/0 2 parties 



et en dernier lieu on la soumet pendant un jour à l'ac- 

 tion d'un bain de nitrate d'argent à 0,75 0/0. 



La pièce est alors lavée dans l'alcool fréquemment re- 

 nouvelé et coupée au microtome en mouillant le rasoir 



avec de l'alcool. Il faut éviter les inclusions ordinaires 

 à la celloïdine et à la paraffine, mais on peut se servir du 

 microtome à congélation. 



La manière de traiter les coupes est extrêmement 

 simple : après les avoir deshydratées par l'alcool absolu, 

 on les éclaircit dans la térébenthine ou dans l'essence de 

 girofle, puis on les monte dans [la résine Dammare au 

 xylol sans mettre de lamelle, comme nous l'avons indi- 

 qué pour les coupes obtenues par le procédé lent de 

 Golgi. 



III. Méthodes dérivées du procédé deGolgi. — Denom- 

 breuses modifications ont été imaginées pour donner de 

 la fixité au précipité d'argent et permettre l'emploi du 

 couvre-objet et d'une coloration ultérieure delà coupe par 

 une autre méthode. Les uns transforment le chromate 

 d'argent en argent métallique en traitant les coupes par 

 une solution alcaline d'hydroquinone, puis par l'hyposul- 

 fite de soude ; les autres font agir le chlorure d'or et 

 changent ainsi les précipités de chromate d'argent en 

 chromate d'or; enfin Greppin invente une méthode que 

 nous allons indiquer. 



Les pièces sont placées dansdu liquide de Millier qu'on 

 rénouvelle tous les jours pendant la première semaine, 

 puis seulement tous les huit jours pendant cinq ou six 

 semaines. On les porte alors dans une solution de ni- 

 trate d'argent ayant déjà servi (0,75 0/0 ou plus faible), 

 d'où on les retire au bout de dix minutes pour les pla- 

 cer pendant 24 à 36 heures dans une solution fraîche de 

 nitrate d'argent à 75 0/0. Les coupes faites au moyen de 

 la congélation sont lavées rapidement à l'eau distillée, 

 puis placées pendant 30 ou 40 secondes dans une solu- 

 tion d'acide bromhydrique à 10 0/0. Elles sont ensuite 

 lavées dans l'eau distillée où on les laisse quelque 

 temps, puis portées dans l'alcool. On les monte ensuite 

 dans le baume en suivant la technique habituelle et on 

 les couvre d'une lamelle. Sous l'influence de l'acide 

 bromhydrique les précipités de chromate d'argent se 

 sont transformés en bromure d'argent qui est blanc; mais 

 si on expose de semblables coupes à la lumière solaire, 

 le bromure d'argent devient noir et l'imprégnation est 

 produite. 



En outre de la possibilité de placer une lamelle sur la 

 préparation, le procédé de Greppinprésente l'avantage de 

 permettre de traiter la coupe imprégnée d'argent par la 

 méthode de Weigert modifiée par Pal. 



Les coupes, soigneusement lavées au sortir de l'acide 

 bromhydrique, sont placées dans la solution suivante : 



Acide chromique gr. 5 



Eau distillée 100 



où elles doivent séjourner 24 heures. On les rince alors 

 dans l'alcool et on les porte dans la solution d'hématoxy- 

 line de Weigert : 



Hématoxyline 1 gr. 



Alcool absolu 10 gr. 



Eau distillée 90 gr. 



Solution saturée de carbonate de lithine. 20 gouttes 



La coloration est produite après un temps variable se- 

 lon la nature des tissus : moelle épinière, deux heures ; 

 cerveau, six ou vingt-quatre heures. On lave les coupes à 

 l'eau distillée mélangée de quelques gouttes de carbonate 

 de lithine, puis on procède à la décoloration. Les coupes 

 passent successivement : pendant 40 secondes dans une 

 solution de permanganate de potasse à 1 p. 400 ; pendant 



