510 



P. S. CHEN. E. KUBLI UND F. HANIMANN 



Derivate der Aminosàuren, deren Konzentration je nach den Arten und Entwick- 

 lungsstadien stark variieren, sind Tyrosinphosphat, Phosphoàthanolamin, Glycero- 

 phosphoàthanolamin, Phosphoserin und Phosphothreonin (Chen und Hanimann 

 1965, Levenbook et al. 1965). 



Fur die Untersuchungen der Aminosàuren und ihrer Derivate in Insekten 

 wird die Papierchromatographie sehr hàufig gebraucht. Die bisherigen Erfahrungen 

 haben aber gezeigt, dass bei Verwendung der gewohnlichen Losungsmittel keine 

 vollstândige Auftrennung dieser Substanzen erzielt werden kann. Bei Drosophila 

 wandern aile Peptide sehr langsam auf dem 2-dimensionalen Papierchromato- 

 gramm und akkumulieren in der Nàhe von Asparaginsàure und Glutaminsàure 

 (Chen et al. 1966). Die Peptide der Phormialarven ùberlappen stark mit den 

 basischen Aminosàuren, wie Ornithin, Lysin und Arginin, die papierchromato- 

 graphisch ohnehin schwer aufzutrennen sind. Eine viel bessere Auflosung kann 

 durch Ionenaustausch-Chromatographie erreicht werden (Chen 1963, Chen und 

 Hanimann 1965, Chen et al. 1967), die aber wegen des komplizierten Verfahrens 

 und der z. T. kostspieligen Einrichtungen in ihrer Anwendbarkeit eingeschrànkt 

 ist. Neuerdings haben wir die freien Ninhydrin-positiven Komponenten in den 

 Larven von Phormia und Drosophila mittels 2-dimensionaler Hochspannungs- 

 Papierelektrophorese untersucht. Dièse Méthode zeichnet sich durch folgende 

 Vorteile aus: (1) eine vollstândige Auftrennung erfolgt innerhalb zwei bis drei 

 Stunden, was einen grossen Zeitgewinn bedeutet; (2) die basischen Aminosàuren 

 und Peptide lassen sich scharf trennen: und (3) in Kombination mit der Nin- 

 hydrinfàrbung und einem spezirl^chen Test (siehe Abschnitt Méthode) konnen die 

 Peptidflecken eindeutig identifiziert werden. Im folgenden berichten wir ùber 

 unsere bisherigen Erfahrungen und einige Ergebnisse, die wir mit der Hochspan- 

 nungselektrophorese gewinnen konnten. 



Material und Méthode 



Als Untersuchungsmaterial dienten verpuppungsreife Larven eines Wild- 

 stammes (Sevelen) und der Letalmutante lu von Drosophila melanogaster, sowie 

 Larven des frùhen 3. Stadiums von Phormia regina. Die Drosophilalarven 

 wurden auf Standardmedium (Mais-Zucker-Hefe-Agar) bei 25 e C aufgezogen; die 

 Phormialarven wurden mit gehacktem Kuhfleisch gefùttert und bei 23 — 24° C 

 gehalten. 



Vor der Entnahme der Hàmolymphe wurden die Larven mehrmals gewaschen, 

 getrocknet und einzeln mit Seziernadeln unter dem Binokular vorsichtig geoffnet. 

 Die herausfliessende Hàmolymphe wurde sofort mit einer Mikropipette auf- 

 gesogen und in ein eisgekùhltes Glasrohrchen eingesammelt. Um die Aktivitât 

 der Tyrosinase zu hemmen, wurden der Hàmolymphe-Probe einige Kristalle von 



