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P. BAUMANN UND P. S. CHEN 



Material und Méthode 



Es wurde ein +/+-Stamm von Drosophila melanogaster bei 25° C und 

 60% Luftfeuchtigkeit auf Standardfutter gehalten. Um den Einfluss der Protein- 

 synthese bei der Eireifung auszuschliessen, wurden nur Mànnchen verwendet. 

 Die jungen Mànnchen hatten ein Alter von 3 Tagen, die alten von 50 Tagen. 

 Bei diesen Zuchtbedingungen ist ein maximales Alter von ca. 70 Tagen erreichbar. 

 Da die Mortalitât von 40 Tagen an stark zunimmt, mussten wir uns auf 50 Tage 

 beschrànken, um noch genùgend Tiere fur unsere Untersuchung zu haben. 



Mit einer selbst konstruierten Injektionsmaschine wurde pro Tier ca. 0,03 u.1 

 Aminosàurelosung mit einer Konzentration von 0,7 — 1,0 mc/mM injiziert. Die 

 spezifische Aktivitàt der uniform mit 14 C markierten Aminosâuren betrug 85 — 

 180 mc/mM. Wegen der Kleinheit der Tiere wurden immer 4 Fliegen fur eine 

 Probe zusammengenommen. Die Proben wurden 0, 30, 60, 90 und 120 min. nach 

 der Injektion genommen. 



Die Fliegen wurden homogenisiert und die Protéine mit 300 \d 0,3 n Perchlor- 

 sàure (100° C) gefàllt. Die Protéine wurden 4 mal mit 300 jjiI Perchlorsâure und 

 2 mal mit Âther-Àthanol (1 :3) gewaschen und in 300 fxl konz. Ameisensâure ge- 

 lôst. 10% der Proteinlôsung wurden fur die direkte Bestimmung der Aktivitàt 

 verwendet. 60% wurden zur Bestimmung der Proteinmenge mittels Biuretreaktion 

 verwendet. 30% wurden mit 6n HC1 (12 h bei 1 10° C) hydrolysiert und die Amino- 1 

 sàuren mit der Hochspannungselektrophorese aufgetrennt (8% Ameisensâure,! 

 pH 2,0, 2500 V, 100 min.). Die Flecken der zu testenden Aminosâure (fur Sicht- 1 

 barmachung siehe unten) wurden mit 60%igem Methanol eluiert und nach dem 

 Eindampfen auf ca. 0,5 ml zur Aktivitàtsméssung auf Planchets aufgetragen. 



Die freien Aminosâuren in der ùberstehenden Lôsung nach Fàllung der Pro- 

 téine wurden mit KOH neutralisiert und bis zur Trockenheit eingedampft. Mit 

 80%igem Âthanol wurden die Aminosâuren aus dem bei der Neutralisation ent- 

 standenen und in Wasser schwerlôslichen Kaliumperchlorat herausgewaschen. 

 Jede Probe wurde halbiert und jede Hàlfte séparât mittels Hochspannungs- 

 elektrophorese in die einzelnen Aminosâuren aufgetrennt. Die eine Hàlfte diente 

 zur Bestimmung der Aktivitàt des Aminosàurepools, die andere Hàlfte zur Be- 

 stimmung der Poolgrôsse. Die Aminosâuren wurden mit 0,005% Ninhydrin in 

 Âthanol gerade sichtbar gemacht und die fur die Aktivitàtsméssung bestimmten 

 Flecken der zu untersuchenden Aminosâure ausgeschnitten, in 60%igem Metha- 

 nol eluiert und auf Planchets aufgetragen. Der Rest des Pherogramms wurde mit 

 einem Cadmium-Ninhydrinreagens nach Atfield und Morris (1961) entwickelt, I 

 und die zu testenden Aminosâureflecken mit 5 ml Methanol eluiert und bei |]j 

 500m[jL mit einem Spektralphotometer (Beckman Modell DU) gemessen. Die 

 Aktivitâten wurden mit einem Gasdurchflusszâhler ohne Fenster der Firmaj 

 Nuclear-Chicago gemessen. 



