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G. RYFFEL UND R. WEBER 



2. Material UND Methoden 



2.1. Vorbehandhing der Tiere. 



Als Versuchstiere dienten Xenopuslarven vom Prometamorphose-Stadium 

 56 und 57 (nach Nielwkoop und Faber, 1956). Fur jedes Experiment wurden 

 Tiere aus derselben Ablage verwendet. Um die Métamorphose vorzeitigauszulôsen. 

 wurden 10" 9 Mol g Korpergewicht L-Thyroxin (Na-salz, Fluka, Buchs, Schweiz) 

 in einer Verdunnung von 1:10 000 in 0,01 n NaOH intraperitoneal injiziert. Die 

 Kontrollen erhielten ein entsprechendes Volumen Wasser. Zur Darstellung der 

 neusynthetisierten RNS wurde eine isotonische Na 2 32 P0 4 -Lôsung ( 32 P-Injection 

 BP.. Radiochemical Centre. Amersham, England) gespritzt. Zur Injektion von 

 Thyroxin und 32 P0 4 wurden die Larven in MS 222 1 :7 000 (Sandoz, Basel, 

 Schweiz) narkotisiert. Wàhrend des Versuches wurden die Tiere nicht gefuttert 

 und das Wasser nicht gewechselt. In einigen spàteren Versuchen wurden Larven 

 verwendet, die ab Stadium 56 wàhrend drei Wochen in ThioharnstofT-Losung 

 (400 mg/1 ) gehalten wurden. Bei solchermassen behandelten Larven unterbleibt 

 die Ausschiittung von endogenem Thyroxin und damit auch die Métamorphose. 

 1m Vergleich zu normalen Larven sind die Tiere jedoch ungefàhr dreimal so 

 schwer. 



2.2 Extraktion der RNS. 



Die Méthode beruht auf derjenigen von Weideli und Mitarb. (1969) und 

 wurde nach einigen Angaben von Kirby (1967) abgeàndert. 



Die Hinterbeine, ein ventrales Stiick der Schwanzbasis (vorwiegend 

 Skelettmuskulatur), die Leber und das Gehirn von 10 bis 20 Larven wurden 

 herauspràpariert, sofort in flussigem Stickstoff eingefroren und bis zur Extraktion 

 mit Trockeneis gekuhlt aufbewahrt. Die verschiedenen Gewebe (100-200 mg) 

 wurden anschliessend in 5 ml Lôsung I (0,1 m Na-acetat pH5; 0,1 m NaCl; 

 10~ 4 m MgCl 2 ; 10~ 4 m MnCl 2 ; 0,5 % Na-dodecylsulfat; lOjig/ml Polyvinylsulfat, 

 Serva, Heidelberg, Deutschland; 500;jLg/mI Bentonit, Serva) mit einem Teflon- 

 Homogenisator bei 0'C aufgeschlossen und zweimal 15 min bei Zimmer- 

 temperatur mit 5 ml Phenol-Kresol-Mischung (500 g frisch destilliertes Phénol; 

 70g farbloses m-Kresol puriss. p.a. Fluka, Buchs, Schweiz; 125ml A. dest.; 

 0,5 g 8-Hydroxychinolin puriss. p.a. Fluka) extrahiert. Die 2. Extraktion wurde 

 in 0.5 m NaCl durchgefuhrt. Aus der wâssrigen Phase wurden die Nukleinsàuren 

 mit 1/10 Volumen 1 m Na-acetat und 2,5 Volumen Alkohol liber Nacht bei 

 — 20'C ausgefàllt. Der sedimentierte Niederschlag wurde in 5 ml Lôsung II 

 (0,01 m Na-acetat pH 5; 0,05 m NaCl; 10" 4 m MgCl 2 ; 2[j.g/ml Polyvinylsulfat 

 mit 100;jig DNase I (DN-C, Sigma, St.-Louis, USA) 30min bei 25°C inkubiert 



